[发明专利]单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用

说明书

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用。所述的单环刺螠糖胺聚糖的制备包括下述步骤：(1)原料处理：将原料单环刺螠制成匀浆液；(2)酶解；(3)超滤；(4)糖胺聚糖的制备：①除蛋白质；②醇沉、洗涤；③阴离子交换柱层析；④凝胶过滤层析得高纯糖胺聚糖。本方法反应条件温和、糖胺聚糖得率及纯度高，抗血栓作用效果好。

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用。

背景技术

血栓性疾病严重威胁人类的生命健康，其发病率高居各种疾病之首，其病因及发病机制十分复杂，迄今尚未完全阐明，目前认为血小板功能异常和血管内皮细胞损伤是血栓形成的重要因素。血栓形成是心脑缺血性疾病的主要致病因素之一，研究表明，脑缺血时，血小板功能异常亢进，血液处于高凝状态，是造成继发性脑损伤的重要原因之一，可见，血小板的活化和聚集在血栓形成中发挥着重要作用。

单环刺螠，俗名海肠、海肠子，属于螠虫动物门、螠纲、无管螠目、刺螠科、刺螠属。分布于俄罗斯、日本、朝鲜和我国渤海湾等，是中国北方沿海泥沙岸潮间带下区及潮下带浅水区底栖生物的常见种。研究发现该糖胺聚糖具有很强的抗凝血和抗血小板聚集作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用。

本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用，所述的单环刺螠糖胺聚糖采用下述方式制备：

(1)原料处理：将原料单环刺螠洗净后，匀浆，制成匀浆液；

(2)酶解：向所述匀浆液中加入枯草杆菌中性蛋白酶，在43℃-47℃水浴条件下酶解4-6h，酶解液煮沸灭酶后，5000r-8000r/min离心10min-15min，得上清液；

(3)超滤：将所述上清液通过相对分子质量1万的中空纤维滤膜超滤分离，得到相对分子质量1万以下和相对分子质量1万以上的两种组分的液体；

(4)糖胺聚糖的制备：

①除蛋白质：将所述相对分子质量1万以上的组分的液体浓缩至该液体体积的1/3-1/4，先用HCl水溶液调pH至2.0，离心除去沉淀，上清液用NaOH 水溶液调pH至7.0，离心除去沉淀，上清液加入三氯乙酸使三氯乙酸的最终质量浓度为3％-5％，离心除去蛋白质沉淀；

②醇沉、洗涤：将步骤①获得的上清液在搅拌下加入乙醇，使乙醇的体积浓度为70％-80％，于4℃条件下静置20-28小时，5000r-8000r/min离心10min -15min，移去上清液，沉淀依次用丙酮和无水乙醇洗涤2-4次，得粗提糖胺聚糖；

③阴离子交换柱层析：将粗提糖胺聚糖溶于蒸馏水中，使其质量浓度为1％ -3％，加到阴离子交换柱中，先用pH＝5.0-5.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液洗脱，再用0-2mol/L梯度的NaCl水溶液洗脱，洗脱液浓缩至洗脱液体积的1/2-1/4、透析、再浓缩至透析后液体积的1/3-1/4；

④凝胶过滤层析：将步骤③获得的浓缩液上样于SephadexG-100凝胶过滤柱，进一步分离纯化，收集的流出液浓缩至流出液体积的1/4-1/6，浓缩液冷冻干燥得高纯糖胺聚糖。

该高纯糖胺聚糖用于抗血栓药物或保健品的使用剂量为200μg-500μ g/kg/d。

所述的单环刺螠糖胺聚糖可以应用于口服、注射或者外用剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本方法反应条件温和、糖胺聚糖得率及纯度高，抗血栓作用效果好。