[发明专利]上调KLF2表达抗LPS诱导HUVECs促血栓因子表达益气活血方的制备方法及应用

说明书

本发明公开上调KLF2表达抗LPS诱导HUVECs促血栓因子表达益气活血方的制备方法及应用，益气活血方由黄芪提取物、生晒参提取物、赤芍提取和红花提取物组成。使用黄芪提取物、生晒参提取物A、生晒参提取物B、赤芍提取和红花提取物组成的益气活血方干预HUVECs细胞后发现药物可显著抑制由LPS诱导的PAI‑1、TF蛋白的表达，显著提高KLF2的表达，抑制LPS的作用；发现当敲低KLF2后，益气活血方失去其原有作用，说明益气活血方抗血栓因子表达具有KLF2依赖性。

技术领域

本发明涉及中药组方。更具体地，涉及上调KLF2表达抗LPS诱导HUVECs 促血栓因子表达益气活血方的制备方法及其应用。

背景技术

血管内皮细胞是覆盖在血管内腔表面的连续单层扁平细胞，是处于血液与血管壁之间的一道天然屏障，正常生理条件下具有维持血管通透性、抗凝、抗炎等作用。而当大量细菌侵入体内，出现脓毒血症或并发症，血液中内毒素(lipopolysaccharide,LPS)浓度升高时，内皮细胞受到炎症刺激，功能发生紊乱，释放大量促凝血因子及细胞表面粘附因子，打破凝血平衡环境，激发凝血级联反应，与其他血管炎症相关因素形成血栓网络，极易诱发血栓的形成。纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和组织因子(tissue factor,TF)是两个凝血反应启动因子，二者表达量的升高加剧血栓形成风险。体外研究表明，用LPS、TNFα等致炎因子刺激人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)后能够诱导 PAI-1和TF的大量表达。

Krüppel样因子家族(Kruppel-like factor,KLFs)属于锌指蛋白的亚类，是一类具有DNA结合区的重要调控因子，参与多种基因的表达调控过程。目前鉴定出的KLFs家族成员有17种，其中KLF2是研究较多的一个，表达于多种细胞，调控机体多项生理、病理反应。KLF2血管内皮中具有较高表达，是重要的内皮功能调控因子，可调控多个血栓相关因子的表达，当过表达HUVECs 中KLF2时，抑血栓因子内皮型一氧化氮合酶、血栓调节因子表达量上升，而促血栓因子PAI-1、TF表达量降低。目前已证实KLF2在炎症诱导血管内皮活化中有调控作用，在炎症因子刺激下，进而抑制KLF2的表达，导致下游促血栓因子PAI-1、TF表达量上升。过表达KLF2时，可以抑制炎性因子诱导的促血栓因子表达。因此，KLF2已成为研究药物抗炎、抗血栓作用的重要靶点。

益气活血方(Yiqi Huoxue Decoction)，是一个传统中药方，由黄芪、生晒参、赤芍和红花组成。黄芪是我国古老的补中益气的中药，近年来人们研究发现黄芪中含有黄芪多糖、黄芪皂苷、黄酮类成分，多种微量元素和以及多种氨基酸等；赤芍含有赤芍内脂苷、没食子酸乙酯、熊果苷、芍药醇、氧化芍药苷等多达20-30种化合物；红花中含有黄酮、生物碱、亚精胺、木质素、有机酸和多糖等多达50种以上化合物；生晒参中含有人参皂苷、人参多糖、聚乙炔醇类、木质素类、有机酸、生物碱等多达上百种化合物。可见黄芪、生晒参、赤芍、红花化学成分及其复杂，对机体的心血管、神经系统、免疫系统、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种作用。然而传统中药大多集中于对于中药组方的研究，以及疗效的研究；随着科技的发展，逐渐转为中药中具体化学成份，以及作用机理的研究。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种上调KLF2表达抗LPS诱导HUVECs促血栓因子表达益气活血方的制备方法及其应用。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：一种上调KLF2表达抗LPS 诱导HUVECs促血栓因子表达益气活血方的制备方法，所述益气活血方由黄芪提取物、生晒参提取物、赤芍提取和红花提取物组成。

上述上调KLF2表达抗LPS诱导HUVECs促血栓因子表达益气活血方的制备方法，生晒参提取物由生晒参提取物A和生晒参提取物B组成，黄芪提取物、生晒参提取物A、生晒参提取物B、赤芍提取物和红花提取物的质量比为 1：(2-4)：(0.5-1.5)：(1-3)：(5-7)。