[发明专利]一种利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法

权利要求书

1.一种利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）内生菌的分离筛选：

a、穗花狐尾藻内生菌分离：

在野外采集植株完整、生长健壮的的穗花狐尾藻，用自来水冲洗干净，然后再用无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸将其吸干，依次用70%乙醇溶液浸泡3-5min、0.8%-1.2%的次氯酸钠溶液浸泡2-3min、0.1%氯化汞溶液中浸泡1-2min，最后用无菌水再反复冲洗8-10次并吸干，将植株剪切成0.8-1.5cm的小段，纵向切开，将切面贴合在牛肉膏蛋白胨固体培养基表面上，将制备完的平板置于25℃恒温培养箱中培养1-2周得到菌体；

b、穗花狐尾藻内生菌筛选：

在无菌条件下，选择步骤a中长势良好、外观完整的菌落，用灭菌的接种环挑出，在牛肉膏蛋白胨固体培养基制作的平板中横向划3-4条直线，纵向划3-4条直线，盖上玻璃盖，在25℃下培养，直至平板中菌落形成，挑选长势良好、完整的菌落，重复划线操作，再次培养形成菌落，得到纯化内生菌;

穗花狐尾藻内生菌的扩繁：

在无菌条件下，将经纯化的内生菌用灭菌的刀片刮下，与缓冲液混合，得到原始菌液；将原始菌液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，培养7-10天，得到穗花狐尾藻内生菌液；

内生菌溶解低品位磷矿粉：

将穗花狐尾藻干燥，研磨，过80目筛，得到穗花狐尾藻粉;

按质量比取葡萄糖10-12、(NH₄)₂SO₄0.3-0.8、NaCl0.2-0.5、KCl0.1-0.3、MgSO₄·7H₂O0.2-0.4、FeSO₄·7H₂O0.02-0.04、MnSO₄·7H₂O0.04-0.06、水950-980混合，调pH=7.1，100-130℃灭菌得到培养基;

c、将低品位磷矿粉、穗花狐尾藻粉、培养基混合，在120-160r·min^－1、25℃下培养15-18天，得到可溶性磷。

2.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述低品位磷矿粉的粒径为100-150目。

3.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述步骤（2）中缓冲液包含如下质量比的原料：水10-12、麦芽糖2-3、甘露醇1-2。

4.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述步骤（2）中纯化内生菌与缓冲液的质量比为1∶（3-5）。

5.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述步骤（2）中原始菌液接种量为牛肉膏蛋白胨液体培养基质量的1%-1.2%。

6.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述步骤（2）中原始菌液培养温度为25℃。

7.根据权利要求1所述的利用穗花狐尾藻内生菌溶解低品位磷矿粉的方法，其特征在于：所述步骤（3）中低品位磷矿粉、穗花狐尾藻粉、培养基的质量比为(15-20)∶(3-5)∶（950-1000）。