[发明专利]自组装核酸适配体DNA纳米火车及其制备方法和应用

权利要求书

1.自组装核酸适配体DNA纳米火车，其特征在于组分为：

M1序列：CGTCGTGCAGCAGCAGCAGCAGCAACGGCTTGCTGCTGCTGCTGCTGC；

M2序列：TGCTGCTGCTGCTGCTGCACGACGGCAGCAGCAGCAGCAGCAAGCCGT；

TA6-tethered trigger序列：

TGCTGCTGCTGCTGCTGCACGACGTTTGAGATTCATCACGCGCATAGTCTTGGGACGGTGTTAAACGAAAGGGGACGACCGACTATGCGATGATGTCTTC；

多肽AKTin序列：AVTDHPDRLWAWEKF；由以下方法制得：以磷酸三氯乙酯为还原剂，100 μL浓度为20 μM的二硫键修饰的M1、M2分别与50 μL的TCEP还原珠混合，在37℃反应振摇2 h；然后将样品1000 × g离心5 min；取上述制备的含有还原了的M1和M2的上清液，分别在上清中加入相同体积的200 μM的马来酰亚胺修饰的多肽AKTin，37℃振荡4 h进行共轭反应，使用高效液相色谱对反应产物进行纯化，去除多余的M1、M2和多肽AKTin得到DNA-多肽复合物：M1-AKTin和M2-AKTin；将M1-AKTin、M2-AKTin和TA6-tethered trigger分别95℃加热5min，冰上冷却5 min后室温下放置1 h；将M1-AKTin、M2-AKTin和TA6-tethered trigger混合，室温下反应振摇24 h得到TA6NT-AKTin。

2.权利要求1所述自组装核酸适配体DNA纳米火车的制备方法，其特征在于制备步骤为：以磷酸三氯乙酯为还原剂，100 μL浓度为20 μM的二硫键修饰的M1、M2分别与50 μL的TCEP还原珠混合，在37℃反应振摇2 h；然后将样品1000 × g离心5 min；取上述制备的含有还原了的M1和M2的上清液，分别在上清中加入相同体积的200 μM的马来酰亚胺修饰的多肽AKTin，37℃振荡4 h进行共轭反应，使用高效液相色谱对反应产物进行纯化，去除多余的M1、M2和多肽AKTin得到DNA-多肽复合物：M1-AKTin和M2-AKTin；将M1-AKTin、M2-AKTin和TA6-tethered trigger分别95℃加热5 min，冰上冷却5 min后室温下放置1 h；将M1-AKTin、M2-AKTin和TA6-tethered trigger混合，室温下反应振摇24 h得到TA6NT-AKTin。

3.根据权利要求2所述自组装核酸适配体DNA纳米火车的制备方法，其特征在于所述M1、M2与多肽AKTin的摩尔比分别为1:10。

4.根据权利要求2所述自组装核酸适配体DNA纳米火车的制备方法，其特征在于所述TA6-tethered trigger与M1-AKTin、M2-AKTin摩尔比为1:3:3。

5.根据权利要求2所述自组装核酸适配体DNA纳米火车的制备方法，其特征在于所述使用高效液相色谱对反应产物进行纯化的方法为：使用19 mm×150 mm，5 µm WatersXBridge C18 色谱柱在室温下进行色谱分离，流动相A为50 mM三乙胺-水溶液，流动相B为100%乙腈；梯度洗脱，洗脱程序为：0～5 min，5～20% B；5～20 min，20%～30% B；20～25min，30%～5% B。

6.装载阿霉素的自组装核酸适配体DNA纳米火车的制备方法，其特征在于制备步骤为将权利要求2制得的TA6NT-AKTin和阿霉素室温下反应振摇2 h得到TA6NT-AKTin-DOX。

7.权利要求6制得的装载阿霉素的自组装核酸适配体DNA纳米火车。

8.权利要求7所述装载阿霉素的自组装核酸适配体DNA纳米火车在制备治疗乳腺癌制剂中的应用。