[发明专利]一种基于Au@Ag核壳纳米粒子电化学检测硫化氢的方法

权利要求书

1.一种基于Au@Ag核壳纳米粒子电化学检测硫化氢的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)Au@Ag核壳纳米粒子的制备；

(2)Au@Ag核壳纳米粒子修饰玻碳电极的制备；

(3)硫化氢的电化学检测；

(4)Hela细胞中内源性硫化氢的检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag核壳纳米粒子的制备方法为：在室温下，将金纳米粒子溶液、磷酸盐缓冲液、聚乙烯吡咯烷酮溶液与抗坏血酸溶液按比例混合，之后再加入硝酸银溶液，避光反应3h，离心水洗，制得Au@Ag核壳纳米粒子，之后定容形成Au@Ag核壳纳米粒子水溶液备用。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述金纳米离子的粒径为17.8±1.8nm；所述金纳米粒子溶液的粒子浓度为1×10^-8mol/L；所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4；所述聚乙烯吡咯烷酮溶液的质量浓度为0.5～5％，体积用量为400～4000μL；所述抗坏血酸溶液的摩尔浓度为0.05～0.2mol/L，体积用量为500～2000μL；所述硝酸银溶液的摩尔浓度为1～5mmol/L，体积用量为0.1～10mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag核壳纳米粒子修饰玻碳电极的制备方法为：

①首先采用三氧化二铝抛光粉对裸玻碳电极进行抛光处理，用乙醇与超纯水超声清洗30～60s，洗净后用氮气吹干；

②然后利用循环伏安法在干净的玻碳电极表面电镀上对氨基苯磺酸；将电镀好的电极浸入五氯化磷溶液中活化5～30分钟后取出清洗干净；

③最后在修饰好的电极表面滴涂Au@Ag核壳纳米粒子水溶液，静置后用水冲洗掉多余未连接的粒子晾干备用。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述三氧化二铝抛光粉的粒径为1.0μm、0.5μm或0.3μm；所述循环伏安法电镀对氨基苯磺酸的体系为三电极体系，其参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂丝电极；所述循环伏安法电镀对氨基苯磺酸的扫描范围为-0.5～0.5V，扫描速度为100mV/s，扫描时间为30分钟；所述对氨基苯磺酸溶液的摩尔浓度为5～50mmol/L，体积用量为1～4mL；所述五氯化磷溶液的摩尔浓度为10～100mmol/L，体积用量为1～4mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫化氢的电化学检测方法为：

将Au@Ag核壳纳米粒子修饰玻碳电极浸入到磷酸缓冲液和硫化钠溶液的混合溶液中反应30分钟，经超纯水冲洗干净后用作工作电极，利用差分脉冲伏安法检测Au@Ag核壳纳米粒子的电化学氧化峰强度变化，以硫化氢浓度的对数值为横坐标，所得的电化学氧化峰电流值为纵坐标，绘制标准曲线。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L；所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4；所述混合溶液的体积为100μL，硫化钠溶液的摩尔浓度为0.05～100000nmol/L；所述电化学检测体系为三电极体系，其参比电极为Ag/AgCl电极，对电极为铂丝电极；所述差分脉冲伏安法检测的扫描范围为-0.2～0.6V；扫描速度为4mV/s；所述差分脉冲伏安法使用磷酸盐缓冲液的体积为2mL。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Hela细胞中内源性硫化氢的检测方法是：

将100μL不同浓度的半胱氨酸分别加入到1mL含有Hela细胞的磷酸钾缓冲液中，37℃条件下，温育90min之后反复冻融裂解细胞，离心后取上清液定容到1mL冷藏备用，最后对定容后的细胞裂解液用差分脉冲伏安法进行检测，根据标准曲线判断检测液中硫化氢的浓度。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有Hela细胞的磷酸钾缓冲液中Hela细胞的浓度为10⁶个/mL，磷酸缓冲液的浓度为50mmol/L；所述半胱氨酸的摩尔浓度为1～5mmol/L；所述反复冻融的温度分别为-80℃、37℃，反复冻融的次数大于3次；用于差分脉冲伏安法检测的细胞分解液的体积为100μL。