[发明专利]一种美洲南瓜TUA基因及应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，提供一种美洲南瓜α‑tubulin（TUA）基因及其作为内参基因的应用。美洲南瓜TUA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用该基因序列设计的美洲南瓜实时荧光定量PCR引物如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示，本发明所设计的实时荧光定量PCR引物特异性强，具有很高稳定性、可靠性和重复性。研究表明美洲南瓜α‑tubulin在不同组织、不同时期及各种非生物胁迫条件下均能稳定表达，适合在美洲南瓜基因表达研究中作为内参基因。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种美洲南瓜不同组织、不同时期及各种非生物胁迫条件下均能稳定表达的α-tubulin（TUA）基因及其作为内参基因的应用。

背景技术

美洲南瓜(Cucurbita pepo L．)，又名西葫芦，为葫芦科(Cucurbitaceae)南瓜属一年生草本植物，原产美洲南部，十九世纪中叶我国开始栽培。美洲南瓜味道鲜美，营养丰富，且具有很好的医疗保健功能，深受大众喜爱，在我国大范围的种植，现已成为仅次于黄瓜的第二大瓜类蔬菜。随着其分子生物学研究的不断深入和发展，基因表达分析正逐渐应用于揭示美洲南瓜基因调控机理的研究中。

实时荧光定量RT-PCR( real-tim e quantitative reverse transcriptionPCR, qRT-PCR)具有定量准确、灵敏度高和高通量等特点，已被广泛应用于基因的表达分析。qRT-PCR 关键步骤是选择合适的稳定内参基因进行校正和标准化。微管蛋白(tubulin)是细胞的一种骨架蛋白，参与细胞内胞质环流、形状维持、运动、分裂、分化、物质运输、信号转导以及极性建成等重要的生理活动，可以分为α、β、γ、δ、ε 等多种亚家族，其中α-tubulin 蛋白和β-tubulin 蛋白组成一种异源二聚体蛋白，大量研究表明α-tubulin 基因在多种植物不同器官中是非组成型表达，作为内参基因在分析植物基因表达中应用广泛。但目前关于美洲南瓜α-tubulin（TUA）基因的克隆和作为关于美洲南瓜内参基因的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种美洲南瓜不同组织、不同时期及各种非生物胁迫条件下均能稳定表达的α-tubulin（TUA）基因及其作为内参基因的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种美洲南瓜内参基因，所述内参基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；根据对美洲南瓜果实转录组Illumina高通量深度测序获得并经验证。

进一步地，以所述内参基因的核苷酸序列为基础，遵循实时荧光定量PCR引物设计的原则设计出一对荧光定量特异引物，该对荧光定量特异引物即为所述实时荧光定量PCR引物；

且该实时荧光定量PCR引物为：

正向引物5'- TTCTCCCGAATTGACCACAA -3'，

反向引物5'- TCCTTCATCGTCCTCACCCT -3'。

本发明的有益效果在于：

本发明提供了一种美洲南瓜内参基因，同时揭露了利用该美洲南瓜内参基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物，所设计的实时荧光定量PCR引物用于美洲南瓜基因表达分析时，能够提高美洲南瓜基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性；此外，所设计的实时荧光定量PCR引物特异性强，从而能够大大提高采用实时荧光定量检测美洲南瓜时的检测效率，并提高检测结果的可信度。

附图说明

图1 是本发明中实施例1的1%琼脂糖凝胶电泳图。

图2 是本发明中实施例2的1%琼脂糖凝胶电泳图。

图3 是本发明中实施例3的PCR扩增曲线图。