[发明专利]用于侵袭性和非侵袭性垂体瘤判断的外泌体检测装置和应用

权利要求书

1.一种用于侵袭性和非侵袭性垂体瘤判断的外泌体检测装置，其特征在于，所述装置包括：

(1)外泌体提取机构：通过离心提取血清中的外泌体；

(2)外泌体表征机构：对所述外泌体提取机构提取得到的外泌体进行表征，以确定确实提取到了外泌体，其中，所述表征指标选自以下一种或多种：形貌、大小、浓度；

(3)外泌体表达量信息测定机构：对所述外泌体提取机构提取的外泌体进行表达量信息的测定，其中，所述表达量信息为蛋白和/或mRNA的表达量信息；

(4)外泌体表达量信息分析机构：对所述外泌体表达量信息测定机构测定的表达量信息进行分析，进行侵袭性和非侵袭性垂体瘤判断。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述外泌体提取机构中，所述外泌体的提取包括以下步骤：

(a)取血清用PBS稀释，第一次离心弃沉淀，取上清第二次离心弃掉沉淀，再次取上清第三次离心弃掉沉淀；

优选地，所述稀释倍数为10～40倍，优选为40倍；所述第一次离心速度为300g～1000g，优选为500g；第一次离心时间为10分钟；所述第二次离心速度为2000g～5000g，优选为2000g；第二次离心时间为15分钟；所述第三次离心速度为8000g～10000g，优选为10000g；第三次离心时间为1小时；

(b)用滤膜过滤步骤(a)所得上清，过滤后的液体离心弃掉上清，再次离心得沉淀，即得到外泌体；

优选地，所述滤膜孔径为0.1～0.5μm，优选为0.2μm；所述离心速度为120000～200000g，优选为120000g；所述离心时间为6～15小时，优选为12小时；所述再次离心速度为120000～200000g，优选为120000g；所述再次离心时间为2小时。

3.根据权利要求2所述的装置，其特征在于，所述外泌体的提取还包括以下步骤：

(c)将步骤(b)离心所得的沉淀，悬浮在PBS中。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的装置，其特征在于，所述外泌体表征机构中，所述形貌表征的机构为透射电镜，优选为生物型透射电镜；所述大小表征的机构为动态光散射机构和/或纳米颗粒跟踪分析机构；所述浓度表征的机构为纳米颗粒跟踪分析机构。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的装置，其特征在于，所述外泌体表达量信息测定机构中，所述蛋白为FOLR蛋白和/或EpCAM蛋白；所述mRNA为PTTG mRNA。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的装置，其特征在于，所述蛋白表达量的测定机构为流式细胞机构和/或Western blot机构。

7.根据权利要求6所述的装置，其特征在于，所述流式细胞机构测定蛋白表达量包括以下步骤：

(I)根据蛋白定量结果，取当量6～20μg蛋白的外泌体，与微球结合，结合时间为10分钟到15小时；

(II)加大于15mM生物甘氨酸或大于10％的牛血清白蛋白溶液停止实验，并封闭微球的反应位点；加入对应的膜蛋白抗体，常温孵育；如果是非直标抗体，则在之后再加入二抗；

(III)使用对应通道的流式细胞仪进行监测并与同型对照抗体的结果对比确定阳性率，确定表达量。

8.根据权利要求6所述的装置，其特征在于，所述Western blot机构测定蛋白表达量包括以下步骤：根据蛋白定量结果，取当量6～20μg蛋白的外泌体，利用电泳的方法跑胶对不同分子量大小的蛋白进行分离和鉴定；在对应分子量处孵育对应的抗体，并用化学发光法进行检测。