[发明专利]用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的引物探针组合物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的组合物，其特征是：包括用于扩增CYP2C9*2位点、CYP2C9*3位点和VKORC1位点的三对特异性引物和三条特异性荧光探针；

所述用于扩增CYP2C9*2位点的特异性引物包括正向引物CYP2C9*2-F和反向引物CYP2C9*2-R，如下:

CYP2C9*2-F：5’GGATGGAAAACAGAGACTTA 3’

CYP2C9*2-R：5’GTCAGTAGAGAAGATAGTAGTCCAGT 3’；

所述用于扩增CYP2C9*3位点的特异性引物包括正向引物CYP2C9*3-F和反向引物CYP2C9*3-R，如下:

CYP2C9*3-F：5’AACGTGTGATTGGCAGAA 3’

CYP2C9*3-R：5’TAGCCCCAAACTGGAAACAAGAG 3’；

所述用于扩增VKORC1位点的特异性引物包括正向引物VKORC1-F和反向引物VKORC1-R，如下:

VKORC1-F：5’CTCAAGTGATCCACCCACCT 3’

VKORC1-R：5’TAGAAGAGAGTAGATGTGAGAAAC 3’；

所述三条特异性荧光探针如下：

（1）用于检测CYP2C9*2位点的特异性荧光探针CYP2C9*2-P：

5’CATTCTTGAACACGGTCCTCAATG 3’ ；

（2）用于检测CYP2C9*3位点的特异性荧光探针CYP2C9*3-P：

5’TCCGAAGGTCAATGTATCTCTGGACC 3’ ；

（3）用于检测VKORC1位点的特异性荧光探针VKORC1-P：

5’AATAAACAACCATTGGCCGGGTG 3’。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征是：所述三条特异性荧光探针均进行了硫代修饰，所述硫代修饰位点均为5’端第1-4个碱基之间的磷酸二酯键。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征是：所述三条特异性荧光探针在5’末端区域均具有荧光基团，在3′末端区域均具有淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征是：所述荧光基团为FAM、HEX或ROX，所述淬灭基团为BHQ1或BHQ2，各特异性荧光探针的荧光基团不同。

5.一种用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的试剂盒，其特征是：包括权利要求1-4中任一项所述的用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征是：还包括PCR混合反应液，所述PCR混合反应液包括：DNA聚合酶、10×HA Buffer、5×Probe qPCR Buffer、dNTPs、dUTP和UDG酶。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征是：PCR混合反应液和用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的组合物一起包装，在用于检测人类CYP2C9和VKORC1基因多态性的组合物和PCR混合反应液的混合物中，CYP2C9*2-F、CYP2C9*3-F和VKORC1-F的浓度均为1-1.5μmol/L，CYP2C9*2-R、CYP2C9*3-R和VKORC1-R的浓度均为0.05-0.08μmol/L，特异性荧光探针CYP2C9*2-P、CYP2C9*3-P和VKORC1-P的浓度均为0.08-0.15μmol/L。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征是： CYP2C9*2-F、CYP2C9*3-F和VKORC1-F的浓度均为1.25μmol/L，CYP2C9*2-R、CYP2C9*3-R和VKORC1-R的浓度均为0.0625μmol/L，特异性荧光探针CYP2C9*2-P、CYP2C9*3-P和VKORC1-P的浓度均为0.1μmol/L。