[发明专利]基于编码悬浮微芯片的级联扩增检测miRNAs的探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.序列如SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5所示的锁式探针。

2.miRNAs的检测试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的锁式探针。

3. 如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于还包括序列如SEQ ID NO: 3所示的滚环扩增引物。

4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于还包括进行等温级联扩增所需的其它组件。

5.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于包括：

序列如SEQ ID NO: 8所示的通用标签；

序列如SEQ ID NO: 4所示的锁式探针和序列如SEQ ID NO: 6所示的捕获探针，

或者，序列如SEQ ID NO: 5所示的锁式探针和序列如SEQ ID NO: 7所示的捕获探针；

所述捕获探针结合于编码悬浮微芯片表面，所述通用标签还具有荧光标记。

6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于包括：

序列如SEQ ID NO: 4所示的锁式探针和序列如SEQ ID NO: 6所示的捕获探针，

以及，序列如SEQ ID NO: 5所示的锁式探针和序列如SEQ ID NO: 7所示的捕获探针；

并且，表面结合有不同捕获探针的不同编码悬浮微芯片具有不同的编码。

7.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：所述进行等温级联扩增所需的其它组件包括聚合酶、核酸内切酶。

8. 如权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述聚合酶包括phi29 DNA聚合酶，Bst DNA聚合酶大片段或Vent exo- DNA聚合酶。

9.如权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述核酸内切酶包括Nb.BbvCI或Nt.BbvCI。

10. 如权利要求2-9中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于还包括核酸外切酶，所述核酸外切酶包括Exo I。

11.基于编码悬浮微芯片的级联扩增检测miRNAs的方法，其特征在于包括：

以目标miRNAs作为模板与锁式探针、RNA连接酶在连接缓冲液中进行连接反应，实现锁式探针的环化；

将连接成环的锁式探针与滚环扩增引物、聚合酶、核酸内切酶及进行等温级联扩增所需的其它组件混合进行等温级联扩增反应，所述滚环扩增引物的序列如SEQ ID NO: 3所示；

将所述等温级联扩增反应的产物与偶联有捕获探针的悬浮编码微芯片、通用标签于杂交缓冲液中进行碱基堆积杂交反应，所述通用标签的序列如SEQ ID NO: 8所示，所述通用标签还具有荧光标记；以及

在所述碱基堆积杂交反应结束后，以光学检测装置对所述悬浮编码微芯片进行观测，实现对于目标miRNAs的检测；

其中，所述锁式探针的序列如SEQ ID NO: 4所示，且对应捕获探针的序列如SEQ IDNO: 6所示；和/或，所述锁式探针的序列如SEQ ID NO: 5所示，且对应捕获探针的序列如SEQ ID NO: 7所示。

12.根据权利要求11所述的基于编码悬浮微芯片的级联扩增检测miRNAs的方法，其特征在于还包括：在所述连接反应完成后，向所获反应混合物中加入核酸外切酶，将未环化的锁式探针降解。

13.根据权利要求11所述的基于编码悬浮微芯片的级联扩增检测miRNAs的方法，其特征在于具体包括：在所述碱基堆积杂交反应结束后，以光学检测装置的明场通道对所述悬浮编码微芯片进行观测，以及，以光学检测装置的荧光通道对所述悬浮编码微芯片进行荧光成像。

14.基于编码悬浮微芯片的级联扩增检测miRNAs的系统，其特征在于包括：如权利要求2-10中任一项所述的检测试剂盒；以及，光学检测装置。