[发明专利]一种铂-纳米花及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种铂-纳米花，其特征在于，其组成成分为：纳米铂、刀豆蛋白ConA、CuSO₄和磷酸盐缓冲液PBS。

2.制备权利要求1所述的一种铂-纳米花的方法，其特征在于，包括以下步骤：

取1.5mL离心管，依次加入10～100μL、30mg/mL纳米铂、0.01～0.1mg刀豆蛋白ConA悬浮于800～1500μL、10mM的磷酸盐缓冲液PBS中，所述磷酸盐缓冲液PBS中含有20μL、120mM的CuSO₄，经震荡混匀、常温静置孵育12～24h后，10000rpm离心3～5min，弃上清后加入100μL、0.1mM的磷酸盐缓冲液PBS悬浮，4℃保存备用。

3.一种含有权利要求1所述的铂-纳米花的具有催化H₂O₂效应的铂-纳米花传感器体系。

4.根据权利要求3所述的铂-纳米花传感器体系，其特征在于，该体系包括修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体、链霉亲和素SA标记的磁珠、铂-纳米花、H₂O₂，用于检测靶标食源性病菌。

5.采用权利要求3或4所述的铂-纳米花传感器体系检测靶标食源性病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制备修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体；

步骤二、将修饰生物素Biotin的食源性病原菌抗体固定在标记链霉亲和素SA的磁珠上；

步骤三、加入待测样品，37℃恒温孵育2h进行磁性分离，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后吸干；

步骤四、加入铂-纳米花，在靶标食源性病原菌存在时，磁珠上的靶标抗体与铂-纳米花之间形成三明治夹心免疫复合物；

步骤五、加入产气底物H₂O₂，激发H₂O₂分解并产生气体，采用一次性注射器吸取气体并读取气体体积，利用气体体积进行计算实现靶标食源性病菌浓度的测定，通过一次性注射器作为信号输出平台对靶标食源性病菌进行检测，利用一次性注射器的体积读数对靶标食源性病菌进行定量及定性。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤二的具体过程为：

将1～10μL标记链霉亲和素SA的磁珠原液置于离心管中，用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次后，加入5～15μL、0.1mg/ml的修饰生物素Biotin的靶标病原菌抗体，37℃孵育1～2h，然后用0.1～0.5mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次，置于磷酸盐缓冲液PBS中混合均匀，得到终产物，4℃保存备用。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤四的具体过程为：

加入3～10μL铂-纳米花，37℃恒温孵育1h进行磁性分离，用0.1mM磷酸盐缓冲液PBS清洗3次，使其悬浮于10μL磷酸盐缓冲液PBS中，得到三明治夹心免疫复合物。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述链霉亲和素SA标记的磁珠粒径为2.8μm，浓度为10mg/mL；所述磷酸盐缓冲液PBS的pH为7.4，其组成成分为：0.1mMNa₂HPO₄和0.1mMNaH₂PO₄。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤五中，加入H₂O₂的体积为1mL，反应时间为3min。