[发明专利]利用羊胎盘提取物增强干细胞表面受体CXCR4表达的方法有效
申请号: | 201810517543.9 | 申请日: | 2018-05-25 |
公开(公告)号: | CN108753876B | 公开(公告)日: | 2022-06-14 |
发明(设计)人: | 华子昂;万君兴;刘宝全;徐元基;竹添 | 申请(专利权)人: | 华子昂 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;C07K14/705 |
代理公司: | 银川长征知识产权代理事务所 64102 | 代理人: | 马长增 |
地址: | 116000 辽宁省大连市*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 利用 胎盘 提取物 增强 干细胞 表面 受体 cxcr4 表达 方法 | ||
1.羊胎盘提取液用于增强间充质干细胞表面受体CXCR4表达的用途,其特征在于:先进行全羊胎盘提取液的制备与保存,然后干细胞传代培养后,利用全羊胎盘提取液进行CXCR4表达诱导,利用全羊胎盘提取液进行干细胞表面CXCR4的诱导表达的终浓度为0.1-5μg/mL(以冻干粉质量计),诱导时间为6-30小时。
2.根据权利要求1所述的羊胎盘提取液用于增强间充质干细胞表面受体CXCR4表达的用途,其特征在于:所述全羊胎盘提取液的制备与保存,包括以下步骤:
S1:取羊胎盘剪切成细小碎块,加入生理盐水在匀浆机中粉碎羊胎盘获取羊胎盘细胞匀浆液,其中羊胎盘与生理盐水按质量体积比(克/毫升)1:2进行匀浆;
S2:将获取的羊胎盘细胞匀浆液通过离心方法收集羊胎盘细胞,弃上清液,为保证细胞完整性,最大相对离心力不能超过1000xg;
S3:将收集到的羊胎盘细胞用生理盐水按质量体积比(克/毫升)1:1悬浮,离心收集羊胎盘细胞,弃上清液;重复洗涤一次后,将羊胎盘细胞用生理盐水按质量体积比(克/毫升)1:1悬浮,分装后冻存于-70℃冰箱中;
S4:从-70℃冰箱取出冻存的羊胎盘细胞置于42℃水浴箱,复融15min,融化后每5min混匀一次,共两次;42℃水浴箱中再重复冻融三次,使羊胎盘细胞充分破碎;然后在相对离心力8000xg以上进行高速离心,收集上清液,得全羊胎盘提取液;
S5:将全羊胎盘提取液用0.22μm的滤膜进行过滤除菌,滤液用于干细胞表面受体诱导或冷冻干燥后保存。
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