[发明专利]一种能应用于细胞溶酶体内HOCl检测的罗丹明B类荧光探针

说明书

本发明公开了一种能够应用于细胞溶酶体内HOCl检测的罗丹明B类荧光探针。该探针以罗丹明B为荧光团，硫代双酰肼为响应基团，并在探针结构中引入吗啉结构作为溶酶体定位基团。在没有HOCl存在时，探针不发荧光；当HOCl存在时，探针在592nm处发出强的荧光。荧光强度随次氯酸浓度的增加而变强，在HOCl浓度为0‑2μM的范围内，荧光强度与次氯酸的浓度成线性增长。该探针具有高选择性，高灵敏度，响应快速的特点，并能应用于细胞溶酶体内HOCl的检测，具有广阔的运用前景。

技术领域

本发明涉及一种能应用于细胞溶酶体内HOCl检测的罗丹明B类荧光探针，该探针能够检测细胞溶酶体内HOCl浓度的变化。

背景技术

HOCl是生物体内重要的活性氧之一，在细胞的氧化还原平衡中有重要作用。当病原体侵入生物时，细胞会产生HOCl氧化杀死病原体；但细胞内次氯酸浓度过高时，会造成细胞功能异常，从而导致诸多疾病的发生，比如阿尔兹海默症，风湿性关节炎，癌症等。因此，实现细胞内HOCl的实时监测，对于生物体HOCl异常相关疾病的研究具有重要意义。

相对于传统的分析方法，荧光探针具有灵敏性高、选择性好、响应快、操作简单、对细胞无损伤等优点，利用荧光探针检测HOCl的方法得到了快速发展。

许多HOCl荧光探针已有文献报道。然而，大部分已经报道的次氯酸荧光探针并不具有细胞器靶向功能，这对研究细胞器水平HOCl的相关研究带来困难。

此外，已报道的HOCl探针需要在较多有机溶剂体系中才能实现对HOCl的检测。而细胞内有机溶剂含量极低，因此，这些探针并不适用与细胞内HOCl的测试 [Shen S.L. etal, Sens. Actuators B 254 (2018) 736-741, Zhang Y.R. et al, Sens. Actuators B240 (2017) 18-36]。

基于此，发明人以罗丹明B为荧光团，以硫代双酰肼结构为HOCl响应基团，合成了一种对HOCl具有高灵敏度和高选择性的荧光探针。该探针具有优异的溶解性，可以在几乎为纯缓冲溶液体系中实现对HOCl的测定。此外探针结构中含有溶酶体定位基团—吗啉结构，探针可以应用于细胞溶酶体内HOCl的检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能应用于细胞溶酶体内HOCl检测的罗丹明B类荧光探针的制备及应用。

本发明公开了一种能应用于细胞溶酶体内HOCl检测的罗丹明B类荧光探针（RL1），其化学结构如下：

本发明所述探针可以用于溶液中HOCl的检测，另外，该探针还可以用于细胞溶酶体内HOCl变化的检测及细胞成像。

本发明的探针的合成方法，如图1所示。

本发明的探针对HOCl具有很好的选择性。如图2所示。

在没有HOCl存在时，该探针不发射荧光；当HOCl存在的情况下，本法明所述的探针发出592 nm的荧光，而且荧光强度随次氯酸浓度的增加而变强，如图3所示。

本发明所述的荧光探针，还可以用于RAW264.7细胞内HOCl的检测，如图4所示。

本发明所述的探针能够靶向溶酶体，能实现溶酶体内HOCl的检测，如图5所示。

附图说明

图1是本发明探针的合成方法。

图2是本发明探针的选择性分析。

图3是本发明探针检测HCOl时荧光强度的变化。

图4是本发明探针的响应时间曲线。

图5是本发明探针应用于RAW264.7细胞内HOCl的检测。