[发明专利]一株产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌突变株及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌诱变菌株F6‑C7及其应用。所述甲壳素脱乙酰基酶高产菌株具体为马红球菌(Rhodococcus equi)F6‑C7，保藏编号为CGMCC No.15723。该菌株是在原始菌株马红球菌F6的基础上，通过ARTP和紫外复合诱变获得，发酵18‑24h后，发酵液中的甲壳素脱乙酰基酶含量达到3400‑3850U/mL，该菌株产甲壳素脱乙酰基酶的速度极快，是目前报道可生产甲壳素脱乙酰基单位酶活力最高的菌株，易于大规模培养。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌诱变菌株F6-C7及其应用。

背景技术：

甲壳素又名几丁质，学名为(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡聚糖，是自然界生物所含有的一种含量仅次于纤维素的氨基多糖，主要存在于无脊椎动物，如虾、昆虫、海藻、真菌及酵母中。但是甲壳素不溶于水、酸、碱和有机溶剂，所以其没有太大的商业价值，而其脱去乙酰基后的产物壳聚糖则广泛应用于医药、食品、化工、化妆品等行业。目前生产壳聚糖主要使用的化学法存在诸多问题，例如，反应时间长、能耗大、产品质量不稳定，特别是排放物会造成巨大的环境污染。

甲壳素脱乙酰酶可以脱掉甲壳素上的乙酰基生产脱乙酰度稳定、分子质量分布范围窄的壳聚糖产品，为解决化学法生产壳聚糖存在的问题提供了一条新的途径。目前国内外关于甲壳素脱乙酰酶产生菌的研究仅有少量的文献报道，微生物来源的甲壳素脱乙酰酶也主要以真菌为主，细菌较少。而且目前因微生物发酵生产甲壳素脱乙酰基酶存在发酵时间长、酶活力低等一系列问题，该酶一直未能实现产业化。因此，从选育性能优良的产酶菌种仍是解决CDA工业化应用的重要课题之一，也具有重要的实用价值和学术研究价值。

发明内容：

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一株能高产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌诱变菌株F6-C7及其发酵方法和应用，本发明提供的高产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌诱变菌株是在原始菌株马红球菌F6(CGMCC No.14861)的基础上，通过ARTP和紫外复合诱变，筛选到的发酵产酶量提高20余倍的高产诱变菌株，是现有技术中所有发酵产甲壳素脱乙酰基单位酶活力最高的菌株，易于大规模培养及产业化应用。

本发明的第一个目的在于提供一株能高产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌诱变菌株F6-C7，该菌株已于2018年5月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.15723。

所述马红球菌(Rhodococcus equi)F6-C7的理化特性如下：革兰氏阳性菌，LB培养基上菌落呈球形，潮湿，菌落颜色为柔和的粉红色，最适生长pH为6-8，最适生长温度为32-38℃。菌落图片见图1。

本发明的第二个目的在于提供所述马红球菌的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种采用马红球菌F6-C7发酵生产甲壳素脱乙酰基酶的生产方法，具体如下：

(1)种子培养

培养条件：搅拌转速为160-200rpm，温度为30-37℃，发酵12-24h；

种子培养基：蛋白胨5-10g/L、酵母浸粉3-8g/L、氯化钠5-10g/L、pH6.0-7.0；

(2)发酵培养

发酵条件：接种量2-10％，搅拌转速为160-200rpm，温度为30-40℃，发酵18-24h；

发酵培养基：酵母浸粉5-10g/L，葡萄糖0.5-2.0g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，磷酸氢二钾1.0g/L，氯化钠0.5-2.0g/L，pH6.0-7.0；

发酵18-24h后，发酵液中的甲壳素脱乙酰基酶含量达到3400-3850U/mL。