[发明专利]一种基于金纳米团簇荧光增强检测脂肪酶活的分析方法

说明书

本发明公开了一种基于金纳米团簇荧光增强检测脂肪酶活的分析方法，其检测原理利用了脂肪酶水解底物巯基乙酸甲酯生成的巯基乙酸一方面能够更加稳定金纳米团簇，另一方面能够弥补金纳米团簇的表面缺陷，从而使其荧光增强，通过金纳米团簇在570nm处荧光强度增加检测脂肪酶活性，这种方法简单、快速、灵敏，最低检出限低至0.37μg/mL。与现有技术相比，本发明具有的优势在于：发展的这种检测脂肪酶活分析方法操作简单快速，成本低廉，不需要特殊的仪器设备。

技术领域

本发明属于纳米生物传感器领域，具体涉及一种基于金纳米团簇荧光增强检测脂肪酶活的分析方法。

背景技术

酶是一种具有催化活性的蛋白质，它由生物体通过自然进化而产生。在不同的有机或无机底物中，酶都能提高化学反应速率，并且它们都具有特异性，由于这种特异性，酶作为识别元件和信号放大元件被广泛地应用于分析检测中。酶的活性依赖于底物浓度、温度、pH和离子强度，酶分析最初采用比色法和核磁共振(NMR)法，但是这些酶活检测方法常常受到低灵敏度和反应时间长的影响。如今无机纳米科学的发展已经提供了各种各样的方法，这些纳米材料、已被应用于高灵敏度的酶活检测。脂肪酶(EC 3.1.1)、又称三酰甘油酯水解酶，除了水解羧酸酯键的自然功能外，脂肪酶还可以催化非水介质的酯化、酯交换和相互酯化反应，传统的检测脂肪酶活性的方法，例如滴定法、浊度法和色谱分析法，因为耗时耗力和成本昂贵，不适合非纯化的样品和大规模的分析检测。

无机纳米材料展现了很多有价值的性能如高吸光度、高荧光强度和催化活性等，这些性质可以被它们所在的物理化学环境所调控。酶反应产物可与纳米材料相互作用，能够改善纳米材料的检测性质，这些性质可用紫外可见光谱，荧光光谱，电化学，表面等离子体共振，石英微晶天平，电子显微镜，电泳，色谱，表面增强拉曼光谱等方法进行检测。

金纳米团簇(AuNCs)作为一种新型荧光纳米材料，在多个领域引起了人们的高度关注。与有机荧光染料相比，AuNCs最显着的特性是其发射峰的尺寸可调，激发带宽，生物相容性好，容易合成和抗漂白的能力。目前，基于AuNCs检测Cu²⁺，Hg²⁺，胰蛋白酶，三聚氰胺和含有磷酸盐的代谢产物已有报道，但是基于金纳米团簇荧光检测脂肪酶活性的文章还没有报道，所以开发一种快速，简单，灵敏的方法检测脂肪酶活性是很有必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种的快速，简单，灵敏的脂肪酶活检测方法。

为实现发明目的，本发明采用如下技术方案：

(1)金纳米团簇的制备；

(2)检测过程：用移液枪移取步骤(1)的金纳米团簇溶液加入巯基乙酸甲酯，再加入PB缓冲溶液来调节pH，加入脂肪酶，混匀，用超纯水定容至1000μL，一定温度下水浴一段时间，以荧光强度作为纵坐标，波长为横坐标，绘制荧光谱图。

(3)脂肪酶活检测标准曲线：将不同浓度的脂肪酶加入到金纳米团簇溶液和PB缓冲液的混合溶液中，一定温度下水浴一段时间后检测其荧光强度，得到不同浓度的脂肪酶对应的荧光强度谱图；以荧光强度作为纵坐标，脂肪酶浓度作为横坐标，绘制脂肪酶活标准曲线。

本发明所述的检测脂肪酶活分析方法，所述的步骤(1)中谷胱甘肽和氯金酸的摩尔比为1∶1。

本发明所述的检测脂肪酶活分析方法，所述的步骤(2)中巯基乙酸甲酯的最优浓度为5mM。

本发明所述的检测脂肪酶活分析方法，所述的步骤(2)中加入缓冲溶液调节溶液pH，最优pH为7.5。

本发明所述的检测脂肪酶活分析方法，所述的步骤(2)中最优反应温度为35℃。

本发明所述的检测脂肪酶活分析方法，所述的步骤(2)中最优反应时间为8min。