[发明专利]一种原代腹膜间皮细胞的分离方法及分离所得PMCs

说明书

本发明涉及一种原代腹膜间皮细胞的分离方法及分离所得PMCs。本发明所述方法从腹膜透析置管术后2周内的患者的透析液中分离原代PMCs。所述方法步骤简单、无创且易于重复，所得原代PMCs具有纯度高、贴壁性好、传代次数多、融合性好，能直接反映PD患者PMCs在PDS中的生理变化等优点。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体而言，涉及一种原代腹膜间皮细胞的分离方法及分离所得PMCs。

背景技术

腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)是构成腹膜最重要的细胞群体，既是一种生物屏障，又是一个分泌器官，能合成和分泌各种物质，在维持腹膜稳态、物质转运、炎症与免疫调节、组织修复中发挥重要作用，且PMCs在透析过程中直接与透析液长时间接触，PMCs作为腹膜的生物屏障，进行超滤和溶质的转运，在维持腹膜内环境的稳定中起着至关重要的作用。因此，体外培养原代PMCs探讨腹膜的病理生理过程，对于防治腹膜纤维化的发生，延长腹膜寿命具有重要意义。

目前常见的原代PMCs的培养方法从外科手术患者的腹膜组织中进行分离，例如大网膜，但该方法存在取材困难且涉及医学伦理学的问题。另一种方法是从PD患者的透析流出液中获取PMCs，该方法虽然简单，但与源自大网膜的原代细胞培养相比，其贴壁慢，且传代少，一般传代至第4代以后细胞就会失去活力，不能融合。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种原代腹膜间皮细胞的分离方法，所述方法步骤简单、无创且易于重复，所得原代PMCs具有纯度高、贴壁性好、传代次数多、融合性好，能直接反映PD患者PMCs在PDS中的生理变化等优点。

本发明的第二目的在于提供一种根据前述方法获得的原代PMCs，所述原代PMCs具有纯度高、贴壁性好、传代次数多、融合性好，能直接反映PD患者PMCs在PDS中的生理变化等优点。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells，PMCs)的分离方法，所述方法从腹膜透析置管术后2周内的患者的透析液中分离PMCs。

本发明还涉及根据前述方法获得的原代PMCs。

具体实施方式

本发明涉及一种原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells，PMCs)的分离方法，所述方法从腹膜透析置管术后2周内的患者的透析液中分离原代PMCs。

原代PMCs通常自腹膜组织(例如大网膜)或者来自一般PD患者的透析流出液，前者不但取材困难还涉及医学伦理问题，后者分离所得的细胞贴壁慢，传代少，一般传代至第4代以后细胞就会失去活力，不能融合。

为解决上述技术问题，本发明提供了前述原代腹膜细胞的分离方法，所述方法从腹膜透析置管术后2周内的患者的腹膜透出液中分离得到PMCs。本发明所述方法分离的PMCs来源于近期行腹膜透析置管手术的患者，首先，本发明所述方法步骤简单，无创且易于重复，能够为患者减少痛苦；其次，本发明所述方法获得的PMCs能够直接反映腹膜透析患者PMCs在腹膜透析液中的生理变化，为下一步体外研究腹膜病理生理打好坚实的基础；再者，本发明所述方法的PMCs取自近期行腹膜透析置管手术的患者，位于该阶段的PMCs能保留较好的功能状态，有利于其病例生理的研究，经过研究发现，本发明所述方法所述原代PMCs培养至第10代，予1：3比例进行传代时，细胞均能在1-2天后融合，展现出良好的融合能力。

在一些具体的实施方式中，所述方法具体包括：无菌收集所述患者的透析液，经离心和洗涤步骤后，使用培养基重悬细胞即得所述原代PMCs。