[发明专利]稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞的构建方法

说明书

本发明公开了稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞的构建方法，包括：1)构建重组慢病毒载体；2)将重组慢病毒载体转染包装细胞进行包装；3)使用包装好的重组慢病毒转导人类星形胶质细胞，得到稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞。本发明方法成功构建得到了在人类星形胶质细胞上持续稳定表达带有红色荧光蛋白的催产素受体，使实时监测OXTR成为可能。同时该慢病毒载体还携带另一个绿色荧光蛋白基因copGFP，能标记星形胶质细胞的整体轮廓，方便对星形胶质细胞进行形态学相关的研究。

技术领域

本发明涉及一种激素表达细胞的构建方法，特别涉及稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞的构建方法。

背景技术

催产素(oxytocin)是一种重要的神经垂体类激素。当它结合到其特异性受体—催产素受体(oxytocin receptor，以下简称OXTR)后，下游的级联信号通路被激活，进而改变靶细胞的生理活动。而随着研究的深入，科学家针对催产素功能的相关研究已从早期主要集中于其对外周系统的作用，拓展到了对中枢神经系统的作用。星形胶质细胞是一大类十分重要的特化的胶质细胞，虽然早前已有报道指出星形胶质细胞会表达OXTR，但是催产素对星形胶质细胞的作用仍不明确。除此以外，在星形胶质细胞中调节OXTR的表达的生物学事件及背后的机制还存在尚未被清楚阐明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞的构建方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞的构建方法，包括以下步骤：

1)构建重组慢病毒载体，该病毒载体为在pCDH-CMV-MCS-EF1α-copGFP骨架中插入了如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

2)将重组慢病毒载体进行包装；

3)人类星形胶质细胞培养与筛选：使用包装好的重组慢病毒转导人类星形胶质细胞，得到稳定表达催产素受体人类星形胶质细胞。

SEQ ID NO.1(下划线标记的序列为linker序列)：