[发明专利]一种利用内置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法

说明书

本发明属于再生医学技术领域，公开了一种利用内置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，包括离心、超声波破碎、离心收集等步骤。本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，同时应用絮状离心沉淀技术，将破碎成熟脂肪细胞产生的油滴汇聚出去，从而达到富集SVFs的效果；且经过超声波处理后，细胞活性大幅度提高、细胞凋亡率大幅度下降，从而使得移植的有效性得到很大提高。由本发明方法制备得到的细胞材料可用于自体移植干细胞疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及再生医学技术领域，具体地，涉及一种利用内置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法。

背景技术

脂肪组织主要由脂肪细胞、脂肪来源干细胞(Adipose-derived stromal/stemcells，ASCs)、血管内皮细胞、周细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、和细胞外基质等组成。ASCs是一群具有多向分化潜能的细胞，脂肪组织中的血管基质部分(SVFs)是脂肪组织经过胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞之后得到的，里面含有丰富的、可塑性极强的ASCs，同时还包括基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、周细胞、免疫细胞以及大量血液循环来源的细胞，比如白细胞、红细胞等，是细胞辅助脂肪移植中最重要的组分。Suga等研究表明从抽脂后抽吸物中获得的SVF，其中有核细胞包括37％白细胞(CD45﹢)，35％ASCs(CD31﹣CD34﹢CD45﹣)，15％内皮细胞(CD31﹢CD34﹢CD45﹣)，还有其他细胞(CD31﹣CD34﹣CD45﹣)。自体脂肪干细胞存在于脂肪细胞间或细胞外基质中，特别存在于血管周围有助于脂肪组织的更新。但这一过程较慢，一般的脂肪抽吸再注射，由于缺乏自体脂肪干细胞而导致最终注射的脂肪萎缩。SVFs在促进移植游离脂肪的存活率方面起到重大作用，而且其来源丰富、取材方便，并且于自身组织无免疫排斥反应，具有非常好的研究和应用前景。

但是，脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞在干细胞治疗方面还存在很多限制因素，例如移植后作用的有效性存在争议，而且分离过程复杂，现有的分离方法主要包括酶解法、推注破碎法等。而酶解法在富集过程中加入了外源性消化酶，且花费较高，需要在特定实验条件下进行；推注法破碎过程较为繁琐且干胶细胞损失较多；玻璃珠法制得的干胶中可能含有少量玻璃碎片，有引发炎症的潜在危险。因此，现急需开发一种能有效提高基质血管片段细胞活性、降低细胞凋亡率的制备方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种利用内置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，本发明采用超声波破碎细胞，不需要加入外源性化学物质从而富集SVFs，能有效提高基质血管片段细胞活性、降低细胞凋亡率。

本发明的另一目的在于提供由上述制备方法制得的基质血管片段细胞材料。

本发明的另一目的在于提供所述脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞材料在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一种利用内置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，包括如下步骤：

S1.将脂肪组织于1000～10000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；

S2.将S1所得滤液超声破碎，超声破碎条件为10～200W、1～300s、20～38℃；

S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～10000rpm条件下离心3～10min；