[发明专利]检测circ_CLASP2的试剂在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测circ_CLASP2的试剂在制备鼻咽癌辅助诊断制剂中的应用及试剂盒。收集多例鼻咽癌组织和正常鼻咽上皮组织，利用qRT‑PCR技术检测了circ_CLASP2的表达情况。结果显示，在鼻咽癌组中circ_CLASP2表达水平大约是正常炎性鼻咽上皮的3倍，两组数据的差异具有统计学意义(P＝0.0386)。因此，提示circ_CLASP2可以作为鼻咽癌辅助诊断分子标记，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种检测环状RNA circ_CLASP2的试剂在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和相应的试剂盒。

背景技术

目前环状RNA(Circular RNA)是个研究热点，circRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体RNA(precursor RNA,pre-RNA)反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。

CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exon circularization)和内含子环化(intron circularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-driven circularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-driven circularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体(splice donor)攻击5’端剪接受体(splice receptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circular intronic RNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。

CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后Hsu MT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。在1996年，circRNA在人类细胞中被发现，随着RNA-seq新一代测序技术的发展，近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。筛选和验证更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)属于头颈部肿瘤，起源于鼻咽部上皮组织。一般在鼻咽部的后外侧隐窝(罗森缪勒窝，Fossa of Rosenmüller)处发病，此处的鼻咽癌细胞易侵袭邻近的组织和器官。由于鼻咽癌的发生发展是由积累的家族遗传和体细胞遗传突变及表观遗传学突变导致的多阶段复杂基因调控过程，涉及到原癌基因和抑癌基因的激活和沉默、及非编码RNA参与的表观遗传学调控等等。所以鼻咽癌发生发展的具体分子机制尚不明确，而且由于肿瘤异质性和个体差异性，传统的放疗联合化疗的疗效不显著。因此通过circRNA探究其与鼻咽癌发生发展机制，进一步为鼻咽癌的诊断，以及控制鼻咽癌增殖、侵袭和转移将是研究的热点。

我们在鼻咽癌细胞5-8F细胞的RNA-seq中检测到长度449bp的circ_CLASP2,其是CLASP2基因2、3、4、5、6号外显子五个外显子反向拼接形成的环状RNA。通过试验发现该环状RNA与鼻咽癌的发生发展存在关联，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。

发明内容