[发明专利]基于iTRAQ蛋白组学识别D-乳酸发酵过程中显著差异表达蛋白的方法

权利要求书

1.一种基于iTRAQ蛋白组学识别D-乳酸高效发酵过程中显著差异表达蛋白的方法；具体步骤如下：

1)、在最优发酵工艺条件下利用L.delbrueckii进行D-乳酸生产；

2)、提取和定量L.delbrueckii在最优发酵工艺条件下对数期胞内总蛋白；

3)、对提取和定量的胞内总蛋白进行酶解和同位素标签标记；

4)对酶解和标记的肽段进行LC-MS/MS检测；

5)、对检测的质谱数据进行数据库检索，进行蛋白的定性和定量分析；

6)、对定性和定量蛋白根据丰度进行差异表达蛋白分析，识别显著差异表达的蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤2)使用细菌总蛋白提取试剂盒提取L.delbrueckii在最优发酵工艺条件下对数期胞内总蛋白，并采用Braford法对提取蛋白进行定量。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤3)对提取和定量的胞内总蛋白采用胰蛋白酶进行酶解，并采用iTRAQ试剂盒对酶解肽段进行同位素标签标记。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤4)采用液相色谱-质谱联用对中酶解和标记的肽段进行检测分析。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤5)是对检测的质谱数据进行数据库检索，进行蛋白的定性和定量分析，检索数据库为SWISS-PROT在线数据库。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤6)结合京都基因与基因组百科全书路径数据库，对步骤5)中识别的差异表达蛋白进行功能路径分析，确定差异表达蛋白所属的代谢路径。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤5)中定性和定量蛋白根据丰度表达水平差异倍数≥2进行差异表达蛋白分析。

8.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤5)中识别显著差异表达的蛋白，包括上调蛋白≥2倍和下调蛋白≤0.5倍。