[发明专利]检测circMAN1A2和circRNF13试剂的应用及试剂盒

说明书

本发明公开了检测环状RNA circMAN1A2和circRNF13试剂的应用及试剂盒。特别是检测这两种环状RNA的实时荧光定量分析法辅助诊断肿瘤的制剂。通过研究证实circMAN1A2和circRNF13在鼻咽癌、口腔癌、甲状腺癌、卵巢癌及肺癌患者血清中均表达上调。因此，将circMAN1A2和circRNF13的表达情况联合用于肿瘤的辅助诊断，进一步提升诊断的准确性，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种检测环状RNA

circMAN1A2和circRNF13的试剂在制备肿瘤辅助诊断制剂上的应用和相应的试剂盒。

背景技术

恶性肿瘤严重危害着人类的健康，近年来中国恶性肿瘤发病率呈现上升的趋势。据中国癌症统计中心统计，恶性肿瘤新发病数约为380.4万例，其中男性患者211.4万例，女性患者169.0万例，大约每一天超过1万人次能被确诊为癌症，大约每分就有7人次被确诊为癌症。恶性肿瘤发病率为278.07/10万，其中男性恶性肿瘤的发病率为301.67/10万，女性恶性肿瘤发病率为253.29/10万。恶性肿瘤发病率的中标率为190.63/10万(人口标准率按2000年中国的标准人口结构),恶性肿瘤发病率世标率为186.53/10万(人口标准率按Segi's世界标准人口结构)，0-74岁的累积发病率大约为21.58％。恶性肿瘤死亡率大约为167.89/10万，其中中标率约106.98/10万，世标率约106.09/10万，0-74岁的累积死亡率约为12.00％。

据美国癌症协会(ACS)统计，美国恶性肿瘤预计新发病数约173.5万例，日均新发4700例。但上世纪90年代起美国恶性肿瘤的发病率开始稳步下降，同时恶性肿瘤死亡率也以每年以1.5％的速度下降。美国恶性肿瘤发病率的明显下降，可能归因于控制吸烟、推广多层次癌症筛查及癌症新型疗法的广泛应用。

由此可见，减少恶性肿瘤的发病因素、有效的早期诊断及新型癌症治疗方法的探索对癌症的控制有着重大的作用。所以我国的医学研究中正致力于寻找新型的肿瘤标志物，以期为恶性肿瘤的早期诊断，以及尽早方便准确的确诊病情从而有利于治疗提供新的途径。

环状RNA(circual RNA,circRNA)是一类新的RNA分子，其构型与传统的线性RNA(含5’和3’末端)不同，环状RNA分子呈封闭环状结构(即5’和3’端首尾相连)，由于没有游离的5’和3’末端，因此环状RNA比线性RNA更加稳定。起初circRNA被认为是一种拼接错误的副产物，并未受到广泛的关注，近年来，基于新一代测序技术的RNA-Sequencing广泛应用推动了RNA许多领域的飞速发展，大量新的circRNA被发现，从而把circRNA推向了恶性肿瘤基因组学研究的舞台中央。

circRNA作为一种新兴的RNA，其行成以及功能机制吸引着越来越多的研究。随着越来越多的circRNA被鉴别，发现一些circRNA的表达水平远远高于其相关线性基因的表达。circRNA以共价键形成环状结构，多数circRNA是反向拼接的产物，在机体广泛的表达，有时其表达水平是线性RNA的10倍，大多定位于胞质。CircRNA可以作为miRNA的分子海绵吸附miRNA、结合蛋白质、或作为基因转录和蛋白翻译的调控因子等发挥重要的生物学功能，很有可能成为恶性肿瘤新的生物标志物和临床治疗靶标，为肿瘤的诊断及预后提供新思路。

因此，需要筛选和验证更多的新型circRNA作为癌症诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。

发明内容

本发明从RNA seq数据中筛选出高表达的circRNA，并分别在多种类型的癌症中先后验证它们的表达情况，寻找到新兴的circRNA能够作为诊断恶性肿瘤的血清分子标志物。