[发明专利]犬胎膜间充质干细胞及制备方法和使用的培养基

说明书

本发明涉及犬胎膜间充质干细胞及制备方法和使用的培养基。所述犬胎膜间充质干细胞是通过包括以下步骤的方法制备得到：消毒和清洗、消化处理、细胞培养、细胞传代、细胞冻存。本发明从犬胎膜制备间充质干细胞的方法呈现优异的技术效果，并且所用的培养基能够大大提高制备干细胞的效率。所制得的间充质干细胞能够有益的治疗犬科动物的关节炎、骨折、肌肉损伤、韧带损伤、软骨损伤、关节损伤、认知功能障碍、免疫介导性疾病、干眼症、复发性葡萄膜炎、肝脏疾病、心脏病、肾脏疾病、糖尿病、胃肠道疾病、甲状腺疾病、皮肤病。

技术领域

本发明属于犬科动物疾病的干细胞治疗技术领域，涉及从犬的胎膜中制备间充质干细胞的方法，以及这种间充质干细胞在治疗犬科动物疾病中的用途。本发明从犬胎膜制备间充质干细胞的方法呈现优异的技术效果。所制得的间充质干细胞能够有益的治疗犬科动物的关节炎、骨折、肌肉损伤、韧带损伤、软骨损伤、关节损伤、认知功能障碍、免疫介导性疾病、干眼症、复发性葡萄膜炎、肝脏疾病、心脏病、肾脏疾病、糖尿病、胃肠道疾病、甲状腺疾病、皮肤病。本发明另外还涉及在制备犬胎膜间充质干细胞的过程中使用的培养基，这种培养基为高效获得间充质干细胞提供了可能。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs或MSC)是存在于机体间质组织中的成体干细胞，可以从胎盘、脐带、胎膜、骨髓、脂肪组织等多种来源获取。MSC具有很强的自我增殖能力和多向分化潜能。在可控条件下，它能在体内或体外分化成如神经细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞和成骨细胞等多种类型的细胞。同时MSC还具有免疫兼容性，不会造成免疫排斥反应，可进行同种异体移植。另外MSC还不具有致瘤性，但可支持造血，并能分泌多种有益细胞因子和免疫因子，因此可安全地用于组织再生和修复治疗，在传统医疗手段束手无策的疑难杂症方面显示出了巨大的治疗潜能。在兽医领域，干细胞疗法能有效地提高动物的生活质量，帮助它们摆脱病痛的困扰。其中犬不仅是重要的伴侣动物，也可经训练成为搜救犬、导盲犬等工作犬，另外它也是新药评估以及临床前药物试验的重要动物模型。目前，在犬干细胞治疗方面，已经有诸多通过间充质干细胞注射成功治疗犬关节炎，骨折、肌肉、韧带或软骨/关节损伤的案例。其它诸如犬类认知功能障碍、免疫介导性疾病、干眼症、复发性葡萄膜炎、各类肝脏疾病、心脏病、肾脏疾病、糖尿病、胃肠道疾病、甲状腺问题、皮肤病等方面的治疗也正在评估中。

巨大的应用前景迫切需要建立高效的犬科动物间充质干细胞分离制备方法，以规模化地分离出高质量MSC。目前犬上常用的MSC来源为脂肪和骨髓，但从这两种来源获取干细胞的过程不可避免地会给供体动物带来创伤和痛苦，而尽管胎盘/脐带、胎膜属于动物生产时的废弃物，但它们也是MSC丰富的来源之一，因此通过它们作为样本分离细胞可以更好地保护动物。

目前从犬的器官/组织，特别是从犬的胎膜，分离制备间充质干细胞的方法有限，且有其局限性。尽管从人类相关组织、器官中分离干细胞已有众多方法报道，例如本申请人研发团队的中国发明专利公开号CN102660501A(中国专利申请号201210159918.1)公开了一种分离和扩增脐带新鲜组织间充质干细胞的方法，然而，可能是由于物种差异的原因，本发明的发明人已经发现，上述专利文献的方法并不适合直接用于犬科动物。

因此，本领域迫切期待有新的方法来从犬的胎膜分离制备间充质干细胞的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种从犬的胎膜制备间充质干细胞的方法，已经出人意料地发现，使用本发明方法从犬的胎膜制备间充质干细胞，呈现令人鼓舞的效果，本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了从犬的胎膜制备间充质干细胞的方法，该方法包括以下步骤：