[发明专利]一种发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的检测方法

说明书

本发明涉及一种发酵虫草菌粉Cs‑4中药饮片的检测方法，具体为采用高效液相色谱法同时检测饮片内容物中的胞苷、鸟苷和腺苷总含量。检测步骤包括：制备供试品溶液、对照品溶液，然后分别注入液相色谱仪进行检测。供试品溶液的制备采用的是加入木瓜蛋白酶和水，静置、超声处理，过滤后续滤液再过微孔滤膜即得。色谱条件包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为水‑甲醇或者0.03‑0.05％SDS水溶液‑甲醇，梯度洗脱。本发明方法供试品中核苷类物质的提取率高，分析得到的各组分峰形好，分离度好。本法操作简单，精密度高、回收率高，稳定性和重复性好。

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的检测方法。

背景技术

发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片是由发酵虫草菌粉(Cs-4)填充而得，具有补肾保肺，秘精益气功能。用于慢性支气管炎，高血脂症，阳痿、遗精、早泄、性欲减退、妇女月经不调、腰酸腹痛、白带清稀等性功能低下症，腰膝酸软、畏寒肢冷、头晕眼花、耳鸣等老年虚症及晚期血吸血病肝硬化。

甘露醇、核苷类、麦角甾醇、虫草多糖、氨基酸等被认为是发酵虫草菌粉的活性成分，因此，收载入中国药典的金水宝片、金水宝胶囊和百令胶囊，以及收载入卫生部药品标准的至灵胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊，均以腺苷或腺苷和甘露醇为含量测定的指标。但是，药典和药品标准中的含量测定指标并不能代表虫草菌粉中的核苷总含量。

雷宁等人研究了采用RP-HPLC测定天然虫草与人工虫草中核苷类成分的含量，其测定的核苷类是指腺嘌呤、腺苷和虫草素，流动相使用的是乙腈和水。虫草属核苷类成分的分析方法除HPLC外，还有毛细管电泳法和薄层色谱扫描法，但是HPLC法用于核苷类成分定量分析具备灵敏度高、分离速度快和分离效率高的特点。

现有的核苷类测定方法，大多使用乙腈-水、水-甲醇-甲酸、磷酸二氢钾-甲醇为流动相；供试品溶液的制备是使用乙醇提取或者水煮的方法提取，总体来说，存在工艺复杂，灵敏度不够的问题。单一的超声波提取制备供试品溶液会出现浑浊现象，稀释后进样会导致色谱柱堵塞。专门针对发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片中的胞苷、鸟苷和腺苷总含量的检测方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的检测方法，尤其是同时测定胞苷、鸟苷和腺苷总含量的方法，为发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的质量控制提供依据。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一种发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的检测方法，Cs-4中药饮片的内容物为发酵虫草菌粉，所述检测方法为高效液相色谱法，包括以下步骤：

S1.供试品溶液的制备：精密称定饮片内容物，加入木瓜蛋白酶，加水并定容，静置，超声处理，过滤，取续滤液过微孔滤膜，经微孔滤膜过滤后的滤液作为供试品溶液；

S2.对照品溶液的制备：精密称定胞苷、鸟苷及腺苷对照品，加水溶解并定容，得对照品溶液；

S3.测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定得到色谱图，根据色谱图计算胞苷(C₉H₁₃N₃O₅)、鸟苷(C₁₀H₁₃N₅O₅)和腺苷(C₁₀H₁₃N₅O₄)的总量；其中，色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相中的A相为水或十二烷基硫酸钠水溶液，B相为甲醇，梯度洗脱。

样品中加入木瓜蛋白酶和水后静置，部分核苷类物质溶解到水里，再进行超声后，核苷类物质的提取率明显提高，检测得到的胞苷、鸟苷和腺苷总含量更接近发酵虫草菌粉Cs-4中药饮片的实际含量，能更准确地反应产品质量。