[发明专利]苦瓜长绿2号杂交种子纯度鉴定特异性标记及方法

说明书

本发明公开了一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记、标记引物及鉴定方法，利用本发明中的特异性标记、分子标记引物及鉴定方法可将‘长绿2号’苦瓜杂交种子与其父本、母本种子区分开来，快速检测出杂交种子的纯度，具有快速、准确、低成本、高通量、便捷实用等优点，能够替代传统杂交种子纯度鉴定的方法，具有较高的商业应用价值。

技术领域

本发明涉及分子检测领域，具体涉及一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记及方法。

背景技术

苦瓜为雌雄同株异花作物，在苦瓜杂交种的制种过程中，母本人工去雄不及时或不彻底，母本的花粉就可能落到母本的雌花柱头上产生自交种子，出现假杂种，这种现象时有发生。此外，收获后的机械混杂也会导致品种混杂。因此，种子纯度是杂交种子质量检验的主要指标之一，在制种后或销售前对苦瓜品种的种子纯度进行鉴定是必不可少的，否则可能给种子经营者及种植户造成难以估量的经济损失。

目前，苦瓜品种鉴定和种子纯度鉴定的方法主要是形态学鉴定与田间种植鉴定相结合的办法。形态学鉴定方法通过种子的形态及幼苗期的形状、颜色、大小等外观以区分，但形态形状容易受到环境因素的影响而导致鉴定结果出现偏差，只适合对亲缘关系较远而少量的样品进行简单分类。田间种植鉴定根据种植品种形态的长期观察，可充分展现品种特征及特性以作为鉴定依据，是鉴定品种真实性和测定种子纯度的较为可靠而准确的方法。然而田间栽培鉴定耗时较长，易受栽培措施及环境因素影响，投入成本大，不具备短时间内达到大量鉴定的要求。

随着分子生物学和基因组学的迅猛发展，DNA分子标记技术在不同作物品种和种子纯度鉴定中的应用日益广泛，表现出快速准确、高效实用的特点；其中SSR分子标记是基于基因组中的简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR)开发出的共显性标记。同一作物不同品种的基因组中有很多SSR(鉴定重复序列)多态性位点，一方面不同SSR的简单重复序列和重复次数不一样，另一方面，即便简单重复序列一样，不同品种之间的重复次数也可能不一样，因而同样的SSR引物利用不同品种的DNA进行PCR扩增的产物、或者说基因组中同样的SSR 引物覆盖的DNA片段的序列就可能存在差异(多态性)。

‘长绿2号’苦瓜是以父本S917007、母本P091728育成的杂交一代品种，该品种主侧蔓结果，结果期喜较强光照、较高温度和充足水分。田间表现抗病抗逆性较强，枯萎病、炭疽病发病轻；耐热性、耐涝性较强；适应性广，适宜春秋栽培，果实手感紧实，耐贮运；已在华南地区大面积推广。因此建立一套准确快速、稳定实用的杂交种子纯度鉴定方法对于保障‘长绿2号’苦瓜种苗的及时销售和安全使用非常重要。

发明内容

本发明的一个目的在于提供用于苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记、用于苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定的SSR分子标记引物以及鉴定方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记，包括母本P091728中的特异性标记P1-A(SEQ ID NO.1)、P1-C(SEQ ID NO.2)和父本S917007中的特异性标记P2-B(SEQ IDNO.3)，和P2-D(SEQ ID NO.4)；

SEQ ID NO.1：

TGAAACGGAACGAAACCTCAGATCTCGAGAACTGGAGGAGGAGAGAGAAAGGAG AGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAATTACCAGTGTTGGTGGGAACTGATCTCCAATTG CCAGGACCATGTTGTTGAATGTAAGAGGCAAGAAGGATGTCA；

SEQ ID NO.2：