[发明专利]一种检测甲基苯丙胺的试纸条及其制备方法和应用方法

权利要求书

1.一种检测甲基苯丙胺的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述反应膜上包被有半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫均粘贴在底板上且中任意相邻两个沿上下方向部分叠加，结合物释放垫的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫下。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球是直径为100nm-500 nm的稀土离子作为标记物的荧光微球，其表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。

4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的激发波长为300-400 nm，发射波长为500-700 nm。

5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述结合物释放垫为玻璃纤维或聚酯材料。

6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）用荧光微球标记甲基苯丙胺抗体，并将其喷涂在结合物释放垫上，以制备喷涂有甲基苯丙胺单克隆抗体-荧光微球标记物的结合物释放垫；

2）将半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂于反应膜上作为检测线（T）和质控线（C）；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

8.根据权利要求7所述的制备试纸条的方法，其特征在于：在步骤1）中取出荧光微球进行活化，然后加入甲基苯丙胺抗体进行共价偶联，结束后加入封闭缓冲液进行封闭，离心洗涤后4℃保存备用。

9.根据权利要求7所述的制备试纸条的方法，其特征在于：在步骤1）中的结合物释放垫用含0.2-1%牛血清白蛋白（质量分数）、pH 7.4的0.02-0.05 mol/L Tris-HCl（含0.1-5 %的海藻糖和0.02-0.1% Tween-20）缓冲液浸泡2 h，37℃下烘干2 h，置于干燥环境中保存备用。

10.一种应用权利要求1-6任一项所述检测甲基苯丙胺的试纸条检测样品中甲基苯丙胺的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）将试纸条和待测样品恢复至室温；

2）开启免疫荧光分析仪，插入对应ID卡，读取标准曲线；

3）向试纸条的样品孔中加入待测样本60-120μL，反应5-10min后，将检测卡插入免疫荧光分析仪；

4）截留在检测线和质控线的荧光微球在最佳激发光下，发出强烈的荧光条带；

5）采用免疫层析分析仪读取检测线和质控线的荧光强度，并给出T/C值，分析仪可通过内置的标准曲线计算出样品中甲基苯丙胺的浓度，并判断阴阳性。