[发明专利]瑞香科植物中活性总二萜的制备方法及其在制药中的用途

说明书

本发明属中药制药领域，涉及瑞香科植物中活性总二萜的制备方法及其在制药中的用途。本发明从瑞香科(Thymelaeaceae)植物瑞香属芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc)、荛花属荛花(Wikstroemia canescens(Wall.)Meisn)和假狼毒属天山假狼毒(Stelleropsis tianschanica Pobed)中富集总二萜成分，并对所得各组分进行主要活性成分含量测定及抗HIV活性测试，结果显示，随着总二萜成分含量的增加，抗HIV活性呈明显上升趋势。当富集组分中总二萜含量大于64％时，即显示极强的抗HIV活性，EC₅₀值可达到0.0047μg/mL，选择指数(SI)大于2000，高效低毒，与阳性对照药物齐多夫定相比具有明显的优势。本发明建立了从瑞香科植物中快速富集总二萜的方法，方法简单、工艺合理、回收率高，且富集的总二萜可以用于制备抗艾滋病毒药物。

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及瑞香科植物中活性总二萜的制备方法及其在制药中的用途，具体涉及一种从瑞香科植物瑞香属芫花、荛花属荛花和假狼毒属天山假狼毒中富集总二萜成分的方法及其在制备抗艾滋病毒药物中的用途。

背景技术

瑞香烷型二萜又名瑞香毒素类化合物，主要存在于瑞香科植物中，现代药理学研究发现其具有抗HIV、抗肿瘤等多种生物活性，尤其是近年来研究发现一系列瑞香烷型二萜化合物具有抗HIV活性强，细胞毒性小，治疗指数高等特点。现有技术公开了瑞香科约48属，广泛分布于南北半球的热带和温带地区，但其瑞香烷型二萜成分含量较低，传统的富集方法如柱色谱需要经过反复的分离富集，操作复杂，耗时长，需要消耗大量有机溶剂，且样品损失大，而高速逆流色谱是一种无需固定相作为载体的快速富集色谱技术，回收率高，效率高，尤其适用于含量较低的成分，目前已被广泛用于天然产物的富集分离。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种从瑞香科植物中快速富集总二萜类成分的方法，进一步提供所制得的瑞香烷型二萜类化合物用于制备抗艾滋病毒药物中的用途。本方法以及富集的总二萜类成分将对研制高效低毒的抗艾滋病毒药物具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的现状，提供一种总二萜的制备方法及其在制药中的用途，尤其是从瑞香科植物中富集总二萜类成分的方法及其在制备抗艾滋病毒药物中的用途。

本发明为实现上述目的采用的技术方案是：

一种从瑞香科植物中制备抗艾滋病毒的总二萜的方法，包括以下步骤：

(1)将瑞香科植物药材与有机溶剂按适当比例混合，提取数次，合并提取液，浓缩回收溶剂并蒸干，得浸膏；

所述的有机溶剂选自甲醇、或乙醇、或乙腈、或丙酮；所述的提取方法选自加热回流提取、或闪式提取、或超声提取、或渗漉提取；

(2)将步骤(1)中所得的浸膏以水混悬后，用有机溶剂萃取数次，合并萃取液，浓缩回收溶剂并蒸干，得萃取物；所述的有机溶剂选自石油醚、或环已烷、或正已烷、或乙酸乙酯；

(3)步骤(2)中所得萃取物通过高速逆流色谱富集，以石油醚：乙酸乙酯：甲醇：水(1～3：1：1～3：0.4～2；v/v)或正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水(1～3：1：1～3：0.4～2；v/v)的混合液为溶剂体系，充分混合后静置分层，上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱的色谱柱，设定在600～1000r/min转速下，水浴温度为15～30℃的条件下，以1～3mL/min的流速注入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态，进样，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，根据流出液的高效液相色谱或质谱确定含有二萜类的色谱峰，并收集合并所对应的流出液，浓缩，得到总二萜；