[发明专利]一种与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽以及诊断试剂盒

说明书

本发明提供了一种能够与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽，所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：L‑P‑Q‑R‑L‑R‑T。本发明还提供了一种肺炎支原体感染血清学诊断试剂盒，所述试剂盒中含有上述与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽。另外，本发明还提供了一种基于噬菌体展示多肽的肺炎支原体诊断试剂盒，该试剂盒中包含有核心噬菌体，其中核心噬菌体为展示上述多肽的噬菌体。本发明所提供的多肽和其相应的核心噬菌体的灵敏度和特异度高，具有良好的临床诊断价值。

技术领域

本发明提供了能够与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽，以及基于多肽的诊断试剂盒，更涉及了一种基于噬菌体展示多肽的肺炎支原体诊断试剂盒，属于生物制剂领域。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)是介于病毒和细菌之间的原核细胞型生物，由其感染引起的病理改变以间质性肺炎为主，约占人和动物非细菌性肺炎的1/2。MP传染性强，尤其易传播于儿童，是社区获得性肺炎的主要病原，因此MP肺炎的早期确诊极为重要。目前肺炎支原体感染主要采用MP的分离培养、血清学检测、PCR检测及物理诊断等方法进行诊断，尚缺乏灵敏、特异的诊断抗原用于MP感染的血清学诊断。有研究采用生物信息学方法预测肺炎支原体P1蛋白C端作为抗原并进行了血清学探索；Steven P等研究表明肺炎支原体P40和P90具有较强的抗原性；另外，有研究表明肺炎支原体P30蛋白的N端含有重要的表位。以往这些研究都是基于传统的蛋白表达与纯化，其操作繁琐、成本高昂且特异性较低。而长的肽段多以空间构象形式存在，其中的优势表位一般只含有5-7个氨基酸或单糖残基，是抗原与抗体结合的关键位点，因此筛选病原体的优势表位成为近年来血清学与疫苗学研究的重点。

表位(epitope)又叫抗原决定簇(antigenic determinant)，通常只有位于抗原表面的表位易与抗体结合，称之为功能性表位，模拟表位则是构象表位上不连续的氨基酸通过空间构象形成的结构，其序列可能与病原体本身蛋白有一定同源性，也可能不具有相似性。筛选优势模拟表位不仅可以避免合成长肽段和表达纯化重组蛋白时的繁琐，而且能克服长链氨基酸因螺旋或折叠导致其与抗体的亲和性不高等缺点，因此成为表位研究的重点，广泛应用于诊断制剂、疫苗研制和蛋白质相互作用关键结合位点的确定等领域。

1985年，Smith首次创建了噬菌体展示技术。1990年，Scott等将噬菌体随机肽库技术应用于筛选抗原表位，获得了与原始抗原性质、结构完全不同，但保留了其免疫原性和免疫反应性的模拟表位。利用该技术不但可以揭示抗原分子的结构和功能、制备广谱疫苗，也可筛选具有高亲和性的优势抗原表位，以优化设计灵敏、特异的ELISA试剂盒，为病原体感染的血清学诊断提供基础。

发明内容

本发明解决了背景技术中的不足，提供了一种能够与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽和展示该多肽的核心噬菌体，所述多肽和其相应的核心噬菌体的灵敏度和特异度高，具有良好的临床诊断价值。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：一种与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽，其特征在于：所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：L-P-Q-R-L-R-T。

本发明还提供了一种肺炎支原体血清学诊断试剂盒，该试剂盒中至少包括包被液、洗涤液、封闭液和终止液，所述试剂盒中含有上述与肺炎支原体阳性血清特异结合的多肽。

本发明还进一步提供了一种基于噬菌体展示多肽的肺炎支原体诊断试剂盒，该试剂盒中至少包括包被液、洗涤液、封闭液和终止液，试剂盒中还包含有核心噬菌体，其中核心噬菌体为展示上述多肽的噬菌体。

以上试剂盒中，所述包被液为0.05M的碳酸盐缓冲液，pH为9.6，所述的洗涤液为含0.05％Tween-20的TBST缓冲液，其pH为7.6，所述封闭液为含5％BSA的TBS缓冲液，所述的终止液为2mol/L的H₂SO₄溶液。