[发明专利]区分非小细胞肺癌细胞与正常肺部细胞的生物标志物研究

说明书

本发明属于医药技术领域，建立了一种测定肺成纤维细胞(MRC‑5)内鸟氨酸、1,3‑丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲肾上腺素、色氨酸和组胺等17种生物胺含量的HILIC‑UHPLC‑MS/MS方法。应用已建立方法测定了人肺成纤维细胞(MRC‑5)与小细胞肺癌细胞(NCI‑H446)中17种生物胺的含量，可实现对肺癌细胞与正常肺细胞之间的区分，并通过独立样本t‑检验和ROC分析筛选出了13种肺腺癌标记物。该方法能够简单快速地同时测定肺成纤维细胞中的17种生物胺的含量。

技术领域

本发明涉及用于评估小细胞肺癌疾病的新生物标记物,所述生物标记物对肺癌病理学改变较敏感,特 别是在疾病或损伤早期阶段。此外,本发明涉及用于评估人患肺癌的风险。

背景技术

肺癌是目前全球发病率和死亡率极高的恶性肿瘤，严重威胁人类的身体健康。肺癌按病理学特征分为 非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。非小细胞肺癌又分为肺鳞癌、肺腺癌和大细胞肺癌，其中 肺鳞癌是非小细胞肺癌主要的类型，非小细胞肺癌的病死率占肺癌的85％以上，癌细胞生长分裂较慢，扩 散转移相对较晚。小细胞肺癌属于未分化癌，其病理类型包括燕麦细胞型、中间细胞型和复合燕麦细胞型， 小细胞肺癌恶性程度较高，生物学行为恶劣，预后凶险。

近年来，人们对肺癌的研究不断深入，对肺癌治疗的认识也在逐渐发展，如今肺癌临床治疗已经进入 了综合治疗的新时代，主要方法为化学治疗、放射治疗、手术切除、靶向治疗以及这几种方法的联合治疗。 世界卫生组织将癌症定义为一种可防治的慢性病，在临床治疗中，一些癌症在早期是可以治愈的。但是， 任何一种有效的肺癌治疗方法都离不开对肺癌类型的精准诊断。开展肺癌早期诊断方法对于提高肺癌患者 生存率具有重要意义。早期诊断方式主要有影像学诊断，病理学诊断和癌症标记物诊断。与其他检查手段 相比，癌症标记物诊断能够在癌变早期筛查出肺部的异常，且具有操作简便、无创伤等优点，在临床上应 用较广。

代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后兴起的系统生物学的一个新的分支，它是通过考 察生物体系受刺激或扰动前后(如将某个特定的基因变异或环境变化后)代谢产物图谱及其动态变化研究 生物体系的代谢网络的一种技术，研究对象主要是相对分子质量1000以下的内源性小分子。与转录组学 和蛋白质组学等其他组学相比，代谢组学具有以下优点：(1)基因和蛋白表达的微小变化会在代谢物水平 得到放大；(2)代谢组学的研究不需进行全基因组测序或建立大量表达序列标签的数据库；(3)代谢物的种 类远少于基因和蛋白的数目；(4)生物体液的代谢物分析可反映机体系统的生理和病理状态。通过代谢组 学研究既可以发现生物体在受到各种内外环境扰动后的应答不同,也可以区分同种不同个体之间的表型 差异由于机体的病理变化，代谢产物也产生了某种相应的变化。对这些由疾病引起的代谢产物的响应进 行分析，即代谢组学分析,能够帮助人们更好的理解病变过程及机体内物质的代谢途径，还有助于疾病的 生物标记物的发现和辅助临床诊断的目的。

发明内容

建立了一种测定肺成纤维细胞(MRC-5)内鸟氨酸、1,3-丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙 酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲肾上腺素、色氨酸 和组胺等17种生物胺含量的HILIC-UHPLC-MS/MS方法。应用已建立方法测定了人肺成纤维细胞(MRC-5) 与肺腺癌细胞(A549)中17种生物胺的含量，可实现对肺癌细胞与正常肺细胞之间的区分，并通过独立 样本t-检验和ROC分析筛选出了11种肺腺癌标记物。可以将非小细胞肺癌患者与健康人区分开来。

附图说明

图1为利用SPSS19.0软件对以上采用上述方法对17种生物胺进行含量测定的结果进行系统聚类分析， 所得到的树状图。

具体实施方式

实施例1

细胞收集