[发明专利]基于比色卡鉴别的黄曲霉毒素吸附剂现场评价试剂装置的制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其是基于比色卡鉴别的黄曲霉毒素吸附剂现场评价试剂装置的制备方法。该制备方法包括以下步骤：（1）制备显色剂；（2）制备40μg/mL的黄曲霉毒素B1甲醇溶液；（3）制备pH3.0盐酸溶液；（4）制备pH 6.5盐酸溶液；（5）制备0.02 mol/L氢氧化钠溶液；（6）制备0.1 mol/L硼酸溶液；（7）制备比色卡；（8）得出评价试剂；（9）比色卡与评价试剂组成试剂装置。本发明通过制作黄曲霉毒素B1浓度‑颜色关系显色卡，调节溶液pH值等反应条件，与显色卡进行比较，得出吸附剂的吸附率。本发明制作方便、操作简单、成本低廉、适于现场操作。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是基于比色卡鉴别的黄曲霉毒素吸附剂现场评价试剂装置的制备方法。

背景技术

霉菌毒素尤其是黄曲霉毒素对动物饲料的污染非常普遍，从而给动物养殖业带来巨大的经济损失。为减少霉菌毒素对动物的危害，生产实践中往往需要通过各种手段对霉菌毒素加以控制。霉菌毒素吸附剂是一类具有吸附霉菌毒素能力的饲料添加剂，能够在动物消化道内与饲料中的霉菌毒素相结合，从而达到减少动物胃肠道对霉菌毒素吸收，增加霉菌毒素通过粪便排出的目的。其中，对特定霉菌毒素的吸附率是评价霉菌毒素吸附剂质量优劣的重要指标。

目前，霉菌毒素吸附剂吸附率的评价主要有体外法和体内法两种。体外法评价的应用最为广泛，一般用不同pH值的磷酸缓冲液来模拟动物胃液和小肠液，向其中加入一定量的毒素与吸附剂，在37℃左右的温度下震荡一定的时间，使吸附剂与毒素充分接触并发挥吸附作用，然后离心分离吸附剂与溶液，用高效液相色谱仪等仪器测定溶液中毒素的浓度，此时溶液中毒素的含量与吸附剂的吸附率呈反比关系，以此来测定吸附剂对某种霉菌毒素的吸附能力。体内法评价需要进行动物饲喂实验，耗时长，费用高，影响因素多，一般仅用于实用效果的验证，不能得出准确的吸附率。由于霉菌毒素吸附剂主要在养殖场应用，但是现行的体外法评价往往需要用到高效液相色谱仪等仪器设备，只能在大中型企业实验室内完成，无法在生产现场使用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为了解决现有的评价设备无法在生产现场使用的不足，本发明提供了一种基于比色卡鉴别的黄曲霉毒素吸附剂现场评价试剂装置的制备方法，通过按照霉菌毒素吸附剂吸附率评价体系所需的黄曲霉毒素B1浓度及反应的溶液体系，制作黄曲霉毒素B1浓度-颜色关系显色卡，通过调节溶液pH值等反应条件，可利用2,6-二溴苯醌-4-氯亚胺与溶液中游离黄曲霉毒素B1进行反应，所得产物绿色的深浅直接与显色卡进行比较，即可直接得出吸附剂的吸附率。本发明制作方便、操作简单、成本低廉、适于现场操作。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种基于比色卡鉴别的黄曲霉毒素吸附剂现场评价试剂装置的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备0.8～1.2mg/mL的2,6-二溴苯醌-4-氯亚胺甲醇溶液的显色剂；

(2)制备40μg/mL的黄曲霉毒素B1甲醇溶液；

(3)制备pH3.0盐酸溶液；

(4)制备pH 6.5盐酸溶液；

(5)制备0.02mol/L氢氧化钠溶液；

(6)制备0.1mol/L硼酸溶液；

(7)利用显色剂、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B1甲醇溶液、氢氧化钠溶液、制备比色卡；

(8)将黄曲霉毒素B1、pH3.0盐酸溶液、氢氧化钠溶液、硼酸溶液、显色剂进行反应，或将黄曲霉毒素B1、pH 6.5盐酸溶液、氢氧化钠溶液、硼酸溶液、显色剂进行反应得出评价试剂；

(9)比色卡与评价试剂组成试剂装置。