[发明专利]米卡芬净钠中间体的发酵方法

说明书

本发明公开了一种全新的FR901379的发酵方法。该方法在FR901379发酵过程中加入棕榈酸甲酯作为FR901379脂肪酸侧链前体物质，促进FR901379的生物合成。同时在发酵液中引入与反应液不相溶的大豆卵磷脂。棕榈酸甲酯除了作为发酵前体，也和大豆卵磷脂一起作为发酵体系中的氧载体，减少气液传氧阻力，解决了现有技术发酵过程溶氧不足的问题，提高了FR901379的发酵产量，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及抗真菌的发酵半合成药物前体的制备，更具体涉及米卡芬净钠中间体FR901379的发酵方法。

背景技术

近年来，由于免疫低下患者逐年增多，真菌感染发病率明显升高，尤其是深部真菌感染的发病率和病死率显著增加。棘白菌素类抗生素是20世纪70年代发现的一组天然产物，具有类似的环状多肽核心和不同的脂肪酸侧链，能够非竞争性地抑制真菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成酶的活性，从而达到抗真菌的目的。与传统抗真菌药物相比，该类药物具有作用机制独特，毒副作用低，且对一些唑类和两性霉素B耐药的真菌具有很强的抗菌活性，是目前临床治疗深部真菌感染的常用药物。FDA已批准上市的这类药物包括卡泊芬净(Caspofungin)、米卡芬净(Micafungin)和阿尼芬净(Anidulafungin)。米卡芬净药用盐为米卡芬净钠。

FR901379是合成米卡芬净类药物的重要前体物质，由C.empetri经突变后获得的高产菌株发酵所得。FR901379通过脱酰酶脱除侧链后得到米卡芬净母核FR179642，FR179642经过化学修饰得到米卡芬净钠。

FR901379的结构如下：

USP5502033、EP0431350A1公布了使用Coleophoma empetri F-11899发酵生产FR901379的过程，发酵培养基包含基本的碳氮源、无机盐，单位100mg/L。CN201010571797.2公开了一种使用Coleophoma empetri F-11899发酵生产FR901379的培养基，优化了碳源和有机氮源，单位提高到300～400mg/L。但现行的发酵生产FR901379的技术中，仍然存在由于发酵液中丝状菌的生长特性，发酵液黏度过高，氧传递效果较差，溶氧偏低，从而抑制了菌体次级代谢，导致FR901379发酵单位偏低的问题。

201010571797.2提供了一种用于菌株Coleophoma empetri F-11899或其变体生产FR901379的发酵培养基，所述发酵培养基含有碳源、有机氮源、无机盐、和金属离子。发酵效价为300～400mg/L。

201611019780.X提供了一种发酵生产FR901379的培养基及其方法，该培养基的组成为果糖、玉米蛋白粉、干酪素、酵母蛋白胨、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙、消泡剂、水，进一步包括在发酵过程中补加果糖和双氧水，经过对发酵培养基的改良，FR901379的产量较高，单位达到3.0～3.4g/L。但是该方法发酵液营养过于丰富，放罐菌体生物量大，分离纯化成本较高。

基于对扩大生产，降低成本的需要，在米卡芬净的生产领域，仍然需要更优的FR901379的发酵方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种全新的FR901379的发酵方法。该方法在FR901379发酵过程中加入棕榈酸甲酯作为FR901379脂肪酸侧链前体物质，促进FR901379的生物合成。同时在发酵液中引入与反应液不相溶的大豆卵磷脂。棕榈酸甲酯除了作为发酵前体，也和大豆卵磷脂一起作为发酵体系中的氧载体，减少气液传氧阻力，解决了现有技术发酵过程溶氧不足的问题，提高了FR901379的发酵产量，降低了生产成本。

本发明使用的菌株来源为Coleophoma empetri F-11899。本发明是这样实现的：