[发明专利]生殖道病原体核酸检测引物、探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及生殖道病原体核酸检测引物、探针、试剂盒及检测方法，本发明的生殖道病原体核酸检测引物，包括：检测生殖道病原体的引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1‑6或SEQ ID No.7‑12所示；检测HPV分型的引物，其核苷酸序列如SEQ ID No.13‑14或SEQ ID No.15‑16所示。本发明的生殖道病原体核酸检测试剂盒，基于量子点和PCR技术，可实现14种生殖道病原体和18种HPV基因分型的同时检测，具有操作简单、价格低廉，可高效、快速、准确地进行32种病原体的检测的优点。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术，特别涉及一种生殖道病原体核酸检测引物、探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

量子点(Quantum dot，QD)又称半导体纳米晶，呈近似球形，其三维尺寸在2-10nm范围内，具有明显的量子效应。量子点一般由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、ZnS等)或III-V族元素(无镉量子点，如InP、InAs等)等半导体材料构成，也可由两种或两种以上的半导体材料构成核/壳结构(如常见的CdSe/ZnS核/壳结构量子点等)。量子点的物理、光学、电学特性远优于现有有机荧光染料，具有灵敏度高、稳定性好、货架期长等优势，是新一代荧光标记探针的最佳选择。

量子点作为标记探针尤其适用于高灵敏度、多指标同时检测等应用领域，其优势如下：

1)量子荧光效率高，摩尔消光度系数大，其荧光强度比现有最强的有机荧光材料光强强20倍以上，适用于高灵敏度检测，结合高分辨荧光显微镜可实现单量子点示踪；

2)具有很好的光稳定性，耐光漂白，适用于长时间稳定激发动态观察以及结果存档；

3)荧光寿命长，有机荧光染料或生物样本背景荧光寿命一般仅为1-10纳秒，而量子点的荧光寿命可持续10-100纳秒，通过时间分辨特性，可降低背景干扰，提高灵敏度；

4)发射波长因组成成分和粒径大小而异，易于制备经表面修饰后特性相似但发射波长不同的量子点；

5)宽泛且连续的吸收光谱，实现单一光源多色激发；

6)发射光谱窄而对称，可减少多色激发过程中不同量子点之间的干扰；

7)量子点具有较大的斯托克斯位移，易与斯托克斯位移较小的有机荧光染料和背景荧光相区分，可通过调整激发光波长或使用滤光片，消除背景，提高灵敏度。

8)表面修饰后具有更好的生物相容性，与多种生物分子偶联，无非特异吸附。

量子点材料在20世纪80年代分别由Alexey I.Ekimov在玻璃基质中，以及LouisE.Brus在胶体溶液中合成，随后量子点表面配基化学修饰技术逐步完善。由于量子点相对于传统荧光染料具有诸多优点，在1998年Alivisatos和Nie将量子点应用于生物分子标记，使用生物活性分子如抗体或抗原等连接在量子点表面修配体的活性基团上，实现了量子点生物荧光染色，开创了量子点生物标记材料的应用研究。

阴道炎是非常常见的一种妇科疾病，居妇女生殖道感染疾病之首。阴道炎的发生、发展是一个多种因素共同作用的结果，生殖道的病原体感染与阴道炎的发生、发展密切相关，生殖道病原体复杂多样，包括细菌、霉菌、滴虫、支原体、衣原体、淋球菌、病毒等。阴道炎根据感染的病原体不同而又分为细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)、外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)和滴虫性阴道炎(trichomonal vaginitis,TV)。细菌性阴道病感染的病原菌主要包括需氧菌(粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、B族链球菌)和厌氧菌(阴道加德纳菌、阴道阿托波尔菌、动弯杆菌)；外阴阴道念珠菌病曾称为霉菌性阴道炎、外阴阴道假丝酵母菌病等，是由念珠菌引起的女性生殖道感染性疾病，其病原菌是以白念珠菌为主的酵母菌，其他如光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌等非白念珠菌占少数；滴虫性阴道炎感染的病原菌是阴道毛滴虫。