[发明专利]高产奶性能娟姗奶牛选育方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及高产奶性能娟姗奶牛选育方法。本申请选用250条10碱基随机引物在由20头高产(305d产奶量4000kg)和20头低产(305d产奶量3200kg)娟姗牛所组成的2个DNA池间进行RAPD‑PCR扩增分子标记筛选方法。用筛选到的200条引物对所有个体进行PCR检测,得到了3个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记,并对它们进行了克隆测序以及生物信息学分析。试验结果表明，有S11、S1110和S1120的DNA片段与产奶量有关，其中S11与产奶量性状正相关，S1110和S1120与产奶量性状呈负相关。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及高产奶性能娟姗奶牛选育方法。

背景技术

娟姗牛是源自英吉利海峡杰茜岛的进口奶牛，是英国政府颁布法令保护的珍贵牛种，其最大的优点就是乳质浓厚，乳脂、乳蛋白含量均明显高于普通奶牛，乳脂率平均为5.5-6%，是乳牛著名的品种。该品种在血统上与瑞士褐牛、德温牛和凯瑞牛有关系，而与荷斯坦牛没有关系。在该品种的早期娟姗牛培育过程中，曾被称为奥尔德尼牛(Alderney)。娟姗牛是主要乳用牛品种中最小的品种之一(凯瑞牛和德克斯特牛更小)。该品种与其他品种相比，耐热性强并以其采食性好，乳脂、乳蛋白率较高而著称。

随着人民生活水平的提高，人们对牛奶的需求量日益增加，如何提高产奶量也一直被畜牧研究者广泛关注。影响奶奶牛产奶量的因素很多，其中遗传因素是主要因素之一。因此从基因水平上对奶牛的产奶量性状进行研究，寻找与产奶量紧密连锁的分子标记或克隆出控制产奶量的基因，对于进行标记辅助选择及培育高产娟姗牛，具有十分重要的意义。随机扩增多态性(Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD) 是由 Williams 和 Welsh在 1990 年发现的一种DNA 多态检测技术。该技术操作简便、快捷，结果准确且灵敏度高。此外RAPD 技术在无须事先了解物种的相关分子生物学信息情况下也可以进行相关标记，因此在品种鉴定、系谱分析、突变体检测、基因定位和遗传育种等方面领域得到广泛应用。已有研究者应用 RAPD 技术筛选中国荷斯坦牛产奶量性状遗传标记，中国荷斯坦牛的乳脂率是3.5%，相比较娟姗牛乳脂率低很多，并且体型与中国荷斯坦牛相比，娟姗牛会小很多，若是能够选育出高产奶的娟姗牛，在同等的养殖面积条件下，将远远提高养殖的经济效益。但是迄今在娟姗牛产奶性能目前未见报道。本研究应用RAPD 技术分别对高产娟姗奶牛组和低产娟姗奶牛组的基因组DNA 进行了多态性分析，并对筛选出的与产奶量相关的标记进行克隆测序及生物信息学分析，以期找到与娟姗奶牛产奶量性状相关的分子标记，为我国南方培育高产娟姗奶牛提供科学依据。

发明内容

鉴于上述内容，有必要提供高产奶性能娟姗奶牛选育方法。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

高产奶性能娟姗奶牛选育方法，

用标记引物S11，序列为GTAGACCCGT，扩增娟姗奶牛血液中的线粒体DNA，如果能够扩增出929bp片段或478bp片段，则标志着该娟姗奶牛为高产奶的娟姗奶牛；或

用标记引物S1110，序列为CAGACCGACC扩增娟姗奶牛血液中的线粒体DNA，如果能够扩增出458bp片段，则标志着该娟姗奶牛为低产奶的娟姗奶牛；或

用标记引物S1120，序列为ACCAACCAGG扩增娟姗奶牛血液中的线粒体DNA，如果能够扩增出669bp片段，则标志着该娟姗奶牛为低产奶的娟姗奶牛。

进一步说明，所述标记引物的是由以下方法筛选得到的：

（1）、取20头高产(305 d 产奶量4000 kg)和 20 头低产(305 d 产奶量 3200kg娟姗牛，颈静脉采血 10 mL ，EDTA-k2 抗凝，-20 ℃保存；