[发明专利]一种脂肪干细胞冻存液及其冻存方法在审
| 申请号： | 201810540613.2 | 申请日： | 2018-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN108739795A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 徐智峰;张新 | 申请（专利权）人： | 广州沙艾生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京华识知识产权代理有限公司 11530 | 代理人： | 刘艳玲 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国际*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冻存液 人血清白蛋白 二甲基亚砜 羟乙基淀粉 甘油 细胞稳定剂 脂肪干细胞 牛血清 对比试验 混合液经 效果满意 冷冻液 原有的 冻存 配制 改进 | ||
1.一种脂肪干细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液包括以下组分：DMEM培养液、F12培养液、二甲基亚砜(DMSO)、牛血清、羟乙基淀粉、人血清白蛋白和甘油；所述各组分的重量百分数如下：DMEM培养液30％-60％，F12培养液10％-30％，二甲基亚砜(DMSO)5％-15％，牛血清2％-8％，羟乙基淀粉1％-10％，人血清白蛋白2％-8％，甘油3％-10％。
2.根据权利要求1所述的脂肪干细胞冻存液，其特征在于，所述各组分的重量百分数如下：DMEM培养液40％-60％，F12培养液20％-30％，二甲基亚砜(DMSO)10％-15％，牛血清4％-8％，羟乙基淀粉5％-10％，人血清白蛋白2％-6％，甘油5％-8％。
3.根据权利要求2所述的脂肪干细胞冻存液，其特征在于，所述各组分的重量百分数如下：DMEM培养液50％，F12培养液25％，二甲基亚砜(DMSO)12％，牛血清8％，羟乙基淀粉7％，人血清白蛋白5％，甘油6％。
4.根据权利要求3所述的脂肪干细胞冻存液，其特征在于，所述牛血清为胎牛血清或小牛血清中的一种或两种。
5.一种利用权利要求1所述的储存液冻存细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将培养好的细胞悬液收集到15ml的离心管中，4℃，1000rpm，离心2-10min，上下加速度均调为0；
S2.去除上清液体部分，每个离心管分别加入2ml权利要求所述的冻存液，使用无菌吸头轻轻吸打，直至变成均匀的细胞悬液；
S3.去无菌的1.5ml离心管，每管加入500-800ul细胞悬液，每个样品冻存3管；
S4.第0-5h将冻存管置于-20℃冰箱中；
S5.第6-12h将冻存管置于-80℃冰箱中；
S6.第13h开始将冻存管置于-196℃的液氮罐中长期保存。
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