[发明专利]一种快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增引物及其应用在审
| 申请号： | 201810543513.5 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108728558A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 李军;吴翠兰;彭昊;潘艳;冯世文;陶立;李常挺;胡帅;马春霞;谢永平;钟舒红;贺会利 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 李彦孚;何承鑫 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 溶血性曼氏杆菌 快速检测 核苷酸序列 分子生物学技术 特异性和敏感性 流行病学调查 传统鉴别 检测工具 检测结果 上游引物 下游引物 可信度 试剂盒 引物 制备 耗时 应用 费力 检测 基层 | ||
1.一种快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增引物，其特征在于，所述PCR扩增引物由具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物组成。
2.根据权利要求1所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增引物，其特征在于，所述的PCR扩增引物是依据溶血性曼氏杆菌gcp基因进行设计，扩增的目的片段大小为220 bP。
3.根据权利要求1或2所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增引物，其特征在于，所述PCR 扩增引物在制备检测溶血性曼氏杆菌试剂盒的应用。
4.一种如权利要求1所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂盒包括具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物以及具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物。
5.根据权利要求4所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂盒还包括PCR预混液和RNase-Free water；所述的PCR预混液由PCR Buffer、dNTPs、ES-Taq DNA组成。
6.根据权利要求4所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂盒的SEQ ID NO:1引物和SEQ ID NO:2引物使用浓度为25 pmol/μL。
7.根据权利要求4或5所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂盒中PCR反应程序为95℃ 5 min；随后进行35个95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃30 s的循环；最后72℃延伸5 min。
8.根据权利要求4或5所述快速检测溶血性曼氏杆菌的PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂盒的结果判定是采用琼脂糖凝胶电泳检测的方法：将PCR扩增产物在1.5％的琼脂糖凝胶上进行电泳，观察是否有目的条带；首先阳性对照和阴性对照成立，如果从样品中扩增出了220 bp的特异性条带，则说明该样品存在溶血性曼氏杆菌；如果样品没有扩增出220 bp的特异性条带，则说明该样品不含有溶血性曼氏杆菌。
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