[发明专利]一种检测猪圆环病毒3型实时定量LAMP引物、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201810543536.6 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108531660A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 李军;潘艳;吴翠兰;彭昊;冯世文;贺会利;钟舒红;胡帅;李常挺;马春霞;谢永平 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 李彦孚;何承鑫 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪圆环病毒 试剂盒 敏感性检测 特异性检测 实时定量 种检测 应用 实时定量检测 病毒基因组 反应缓冲液 定量检测 检测结果 实时监测 样品准备 超纯水 拷贝数 引物 合成 便利 检测 | ||
1.一种检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP引物，其特征在于，所述LAMP引物如SEQ IDNO：1~6所示。
2.根据权利要求1所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP引物，其特征在于，所述的SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2序列可用于PCR检测，用于PCR检测其扩增片段大小为237 bp。
3.一种如权利要求1所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括具有SEQ ID NO:1~6 所示核苷酸序列的引物。
4.根据权利要求3所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、超纯水和猪圆环病毒3型DNA模板。
5.根据权利要求4所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒，其特征在于，所述的猪圆环病毒3型DNA模板是提取自猪圆环病毒3型细胞培养物，是使用病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取。
6.一种如权利要求4所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒的应用，其特征在于，具体步骤包括：
（1）样品准备
（2）LAMP引物的设计与合成
（3）病毒基因组 DNA模板的提取
（4）LAMP反应体系建立
（5）LAMP检测方法。
7.根据权利要求6所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒的应用，其特征在于，所述的样品准备包括试验毒株、菌株复壮培养，临床组织样品采集，试剂配制。
8.根据权利要求6所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒的应用，其特征在于，所述的LAMP反应体系建立以25μl计，
2×反应缓冲液 12.5 μL
Bst DNA聚合酶 1 μL
SEQ ID NO：1 5 pmol
SEQ ID NO：2 5 pmol
SEQ ID NO：3 40 pmol
SEQ ID NO：4 40 pmol
SEQ ID NO：5 25pmol
SEQ ID NO：6 25pmol
猪圆环病毒3型DNA模板 2 μL
超纯水 补足25 μL。
9.根据权利要求6所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒的应用，其特征在于，所述LAMP检测方法的反应温度为63℃，反应在12-15 min出现扩增。
10.根据权利要求6所述检测猪圆环病毒3型的实时定量LAMP试剂盒的应用，其特征在于，所述的LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和定量检测的方法。
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