[发明专利]肠道病毒PCR质控品装甲RNA及制备方法在审
| 申请号： | 201810544017.1 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108795961A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 胡群;马思杰 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国大榭出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/41;C07K14/085 |
| 代理公司： | 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程晓明 |
| 地址： | 315812 浙江省宁*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肠道病毒 质控品 表达载体 质粒 制备 核苷酸序 离心收集沉淀 原核表达菌株 大肠杆菌 病毒样颗粒 超声波破碎 诱导表达 降解 储存 转入 安全 | ||
1.肠道病毒PCR质控品装甲RNA，其特征在于该装甲RNA的表达载体为 pET32a- MS2-CP-ENV-2B质粒，该表达载体pET32a- MS2-CP-ENV-2B质粒转入大肠杆菌原核表达菌株BL21中，诱导表达，超声波破碎后离心收集沉淀，获得肠道病毒PCR质控品装甲RNA的病毒样颗粒，其中该表达载体pET32a- MS2-CP-ENV-2B质粒中，MS2-CP的核苷酸序列为序列表中SEQID NO:1所示，ENV-2B的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:2所示。
2.权利要求1所述的肠道病毒PCR质控品装甲RNA的制备方法，其特征在于步骤如下：
a. ENV-2B获得：以肠道病毒属CODEHOP引物E4559/ FE4937扩增临床分离的阳性CODEHOP样本，并将扩增序列克隆至pUCm-T质粒载体中，获得目的序列片段pUCm-ENV-2B；
b. 噬菌体MS2-CP获得：以Genbank数据库中噬菌体MS2基因序列为基本序列，将序列递交生物公司进行合成，序列包括5’非编码区序列、成熟酶蛋白基因序列、衣壳蛋白基因序列、包装位点和复制酶基因序列，在序列5’端和3’端分别插入Kpn I 、BamHI酶切位点，双酶切后插入到原核表达载体pET32a中，获得表达载体pET32a-MS2-CP；
c. pET32a- MS2-CP-ENV-2B质粒获得：将pET32a-MS2-CP和pUCm-ENV-2B均使用BamHI、Not I双酶切，回收pET32a-MS2-CP和ENV-2B序列片段并相互连接，然后转化至DH5α菌株，获得肠道病毒装甲RNA表达载体 pET32a- MS2-CP-ENV-2B质粒；
d. 肠道病毒装甲RNA获得：将pET32a-MS2-CP-ENV-2B质粒转入大肠杆菌原核表达菌株BL21中，诱导表达，超声波破碎后离心、收集沉淀，获得肠道病毒装甲RNA的病毒样颗粒。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中华人民共和国大榭出入境检验检疫局，未经中华人民共和国大榭出入境检验检疫局许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810544017.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
