[发明专利]预判断脓毒症感染情况的荧光定量PCR检测试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种预判断脓毒症感染情况的荧光定量PCR检测试剂盒及其方法。所述试剂盒包括：拟杆菌门正向引物和反向引物、厚壁菌门正向引物和反向引物、变形菌门正向引物和反向引物、放线菌门正向引物和反向引物，和PCR预混液以及荧光定量PCR检测方法用试剂。本发明通过检测人体肠道菌群门分类水平结构，为脓毒症的诊断提供可靠的感染证据以及感染的病原学类型，可用于临床脓毒症的辅助诊断，为患者采取相关的抗生素治疗提供有效的依据，临床应用前景良好。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种预判断脓毒症感染情况的荧光定量PCR检测试剂盒及其方法。

背景技术

脓毒症是感染引起的宿主反应失调而导致的致死性器官功能障碍的临床综合症，其发病率和病死率一直居高不下，是全球医学界面临的突出难题。虽然国际上对脓毒症的指南一直在不断地更新和完善，但临床医生在诊断脓毒症时仍然面临许多困境。其中，病人的情况是不是感染，或者说出现的器官功能不全是不是因感染所致，对于这样的问题根据现有的技术并不能很好解释。目前，有多达40％的被诊断为脓毒症的ICU患者事实上并不是感染，因而并不是真正的脓毒症。因此，如何有效判断脓毒症的感染情况，对于脓毒症的诊断和治疗来说十分关键。

目前，对于脓毒症病原学的诊断方法主要包括：(1)血培养：血培养结果阳性是诊断脓毒症的“金标准”，但并非所有脓毒症患者都有引起感染的病原微生物的阳性血培养结果，仅约45％的脓毒性休克患者可获得阳性血培养结果。同时，血培养阳性率会受到例如采血量、采血时间、采血次数等因素的影响，对于脓毒症的血培养阳性率会有一定干扰。此外通过血培养来诊断脓毒症耗时长，通常需要48～72小时。(2)血常规：目前临床上认为白细胞5×10⁹/L或大于20×10⁹/L应高度怀疑感染，然而有研究表明50％的新生儿脓毒症患儿白细胞可在正常范围内，而且异常白细胞计数在其他病理条件下也可出现，因而白细胞计数对于脓毒症感染的诊断缺乏敏感性和特异性。(3)炎性指标：C反应蛋白和降钙素原是目前临床上用得最多的诊断脓毒症的生物标志物，它们被看作是细菌感染的特异性标志物，但在一些非感染的情况(如手术后、创伤等)下其水平也会升高。(4)白细胞介素6水平由于在脓毒症发生时变化非常敏感，故在ICU常被作为脓毒症的早期诊断标志物，但它在急性炎症反应综合症和脓毒症区分中的价值一直存在争议，因为在创伤、手术或自身免疫性疾病等情况下白细胞介素6水平会发生改变。

发明内容

本申请人经研究发现脓毒症会引起肠道菌群结构的改变，虽然脓毒症发生时如何改变肠道菌群的机制仍不清楚，但肠道菌群结构的改变可以预示脓毒症的发生发展并为脓毒症的诊断提供可靠的感染证据以及感染的的病原学类型，并且不同的肠道菌群结构可以预示患者所感染病原体的类型(革兰阳性菌、格兰阴性杆菌)。因此，通过检测可疑脓毒症患者肠道菌群的结构，不仅可以明确该患者是否有感染，而且可以确定具体感染的病原学类型，以指导后续抗生素的合理使用。由于脓毒症进展十分迅速，因此，快速的肠道菌群结构检测手段对可疑脓毒症患者肠道菌群检测十分重要。目前，国内外所采用的肠道菌群结构定量检测方法主要为高通量测序，虽然它对肠道菌群信息可进行全面的分析，但检测过程往往长达一个月，这远远不能满足对肠道菌群快速检测的要求。本发明针对现有技术中脓毒症诊断难的技术问题，目的在于提供一种预判断脓毒症感染情况的荧光定量PCR检测试剂盒。

本发明的预判断脓毒症感染情况的荧光定量PCR检测试剂盒包括：