[发明专利]间皮素检测细胞质控片

权利要求书

1.一种间皮素免疫组化检测细胞质控片，包括切片区；所述切片区粘附有石蜡切片，所述石蜡切片含有4种起对照作用的表达间皮素的阴性、弱阳性、阳性、强阳性细胞团。

2.权利要求1所述的细胞质控片，所述4种细胞团是4种间皮素表达量不同的细胞，分别是：间皮素阴性表达的293细胞、间皮素弱阳性表达的CFPAC-1细胞、间皮素阳性表达的OVCAR-3细胞、间皮素强阳性表达的OVCAR-3-MSLN细胞。

3.权利要求2所述的细胞质控片，其中所述OVCAR-3-MSLN细胞为经遗传修饰从而表达外源MSLN蛋白的OVCAR-3细胞。

4.权利要求1所述的细胞质控片，所述石蜡切片的厚度是3-5μm。

5.权利要求1所述的细胞质控片，所述细胞团的直径为3-5mm。

6.权利要求1-5任一权利要求所述的细胞质控片在制备间皮素检测试剂中的用途。

7.间皮素强阳性表达的OVCAR-3-MSLN细胞在制备间皮素免疫组化检测试剂盒质控片中的应用，所述OVCAR-3-MSLN细胞由OVCAR-3细胞转入外源MSLN基因获得，其能够表达外源MSLN蛋白。

8.一种用于免疫组织化学技术检测间皮素蛋白质量控制的参照物，所述参照物包括：阳性对照物、阴性对照物；其中，阳性对照物为：CFPAC-1细胞、OVCAR-3细胞以及OVCAR-3-MSLN细胞，其中所述OVCAR-3-MSLN细胞为经遗传修饰从而表达外源MSLN的OVCAR-3细胞；阴性对照物为：293细胞。

9.一种非诊断目的的免疫组化检测方法，所述方法使用权利要求1-5的细胞质控片作为对照。

10.一种用于制备间皮素免疫组化检测细胞质控片的方法，其包括以下步骤：

(1)细胞培养

对293细胞、CFPAC-1细胞、OVCAR-3细胞以及间皮素强阳性表达的OVCAR-3-MSLN细胞在培养基中进行培养；

(2)细胞收集与固定

培养上述细胞至其铺满细胞培养皿底部的80-90％时，收集细胞；清除培养基，磷酸缓冲盐溶液洗涤，胰酶消化，显微镜下观察细胞变圆时，加1ml细胞培养基终止消化，用移液器将细胞处理均匀、收集并计数，加入磷酸缓冲盐溶液洗涤细胞，离心，弃上清，细胞用4％多聚甲醛或10％中性福尔马林固定液重悬，室温固定；

(3)琼脂糖支撑细胞

琼脂糖凝胶配制：称取琼脂糖加磷酸缓冲盐溶液配制成3-4％浓度的溶液，加热至琼脂糖溶解，取出置于60℃水浴中保温待用；

细胞与琼脂糖混合：经过固定过程，自然沉降至体积约100μl，用移液器小心移去上清；将盛有细胞的离心管在60℃水浴中预热，用预热的移液器移取与细胞等体积的琼脂糖凝胶，加入离心管中与细胞混匀，混匀后的琼脂糖、细胞混合物转移到注射器针管中，室温冷却成型；

(4)细胞团脱水

将与琼脂糖混合的细胞团取出，切成小段，放置在做好标记的脱水筐内；将细胞团依次浸入不同浓度梯度的乙醇中进行组织脱水；

(5)细胞团透明

将步骤(4)获得的细胞团依次浸入到二甲苯中进行透明；

(6)细胞团浸蜡

将石蜡块置于浸蜡杯中于65℃烘箱中一段时间至石蜡完全融化，将进行组织透明后的细胞团浸入到融化的石蜡中进行组织浸蜡；

(7)细胞团包埋

将融化的石蜡倒入组织包埋底模中，将浸蜡结束的细胞团从相应的脱水筐中取出，放入到组织包埋底模的石蜡中，将包埋框覆盖在包埋盒上，转移至冷却台上冷却，获得组织包埋石蜡块。