[发明专利]间充质干细胞条件培养基在改善缺氧/复氧诱导的细胞损伤中的应用

说明书

本发明公开了间充质干细胞条件培养基在改善缺氧/复氧诱导的细胞损伤中的应用。属于生物医药领域。所述间充质干细胞条件培养基通过以下方法制备：（1）：获得间充质干细胞；（2）在完全培养基中培养步骤（1）中所得的间充质干细胞；（3）将第二代间充质干细胞传代，以1*10⁶个接种于75cm²培养瓶中，培养24小时，弃培养上清，PBS洗2遍，加入10ml新鲜含1%胎牛血清的细胞培养基，所述细胞培养基的基础培养基为目的细胞的基础培养基，在37℃，5%CO₂环境下培养24h；（4）取上清过滤，滤液即为间充质干细胞条件培养基。本发明中所获得的间充质干细胞条件培养基可以改善缺氧/复氧诱导的多种细胞损伤。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及间充质干细胞条件培养基在改善缺氧/ 复氧诱导的细胞损伤中的应用。

背景技术

缺血性疾病在临床上非常常见，对于缺血的器官或组织，及时恢复血供是最为有效的治疗方法。但恢复血供的同时亦可引起更为严重的损伤，称之为缺血再灌注损伤(即缺氧/复氧诱导的细胞损伤)。及时恢复血供，虽然可以缓解患者症状，但很难以从根本上恢复损伤细胞数量，改善预后。

间充质干细胞是一种多能成体干细胞，能在体外特定的诱导条件下，分化为脂肪、软骨、骨、心肌、神经等，由于来源广泛、无伦理学限制等优点，应用很为广泛。有研究表明，间充质干细胞对心、肝、肺、肾、脑等器官损伤有一定的治疗作用。间充质干细胞的治疗作用主要依赖于其旁分泌的细胞因子。间充质干细胞条件培养基相对于干细胞而言，更易获得、使用方便且无细胞免疫原性及致瘤性。

细胞条件培养基应用的文献报到众多，但其收集方法尚无统一标准。建立并优化间充质干细胞条件培养基的收集方法，有利于增加科研实验的可重复性和结果可靠性。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明通过实验证明间充质干细胞的条件培养基可以有效改善缺氧/复氧诱导(H/R)的多种细胞的损伤，因此，间充质干细胞条件培养基具有治疗缺血/再灌注损伤性病变的潜在功能。

为实现以上目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供间充质干细胞条件培养基在改善缺氧/复氧诱导的细胞损伤中的应用，该间充质干细胞条件培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)获得间充质干细胞；

(2)在完全培养基中培养步骤(1)中所得的间充质干细胞；

(3)将第二代间充质干细胞传代，以1*10⁶细胞接种于75cm²培养瓶中；培养24小时后，弃培养上清，PBS清洗2次；加入10mL新鲜含1％胎牛血清的细胞培养基，所述细胞培养基为目的细胞的不含血清和双抗的基础培养基， 37℃，5％CO₂条件下培养24小时；

(4)取上清过滤，滤液即为间充质干细胞条件培养基。

优选地，上述步骤(1)所述的间充质干细胞来源于骨髓、脂肪、脐带、胎盘等组织，优选来源于骨髓的间充质干细胞(BMSC)。

优选地，上述步骤(4)所述的过滤，是选用0.22μm的滤膜过滤。

优选地，上述应用，是将所得的条件培养基作为保护成分加入到目的细胞完全培养基中，所加比例为50％。

与现有技术相比较，本发明的效果是：

1、本发明首次将间充质干细胞条件培养基应用于改善缺氧/复氧诱导的细胞损伤中，证明可以有效改善缺氧/复氧诱导的多种细胞的损伤，如：间充质干细胞条件培养基能够提高受损细胞的存活率，抑制缺氧/复氧诱导的细胞凋亡，降低乳酸脱氢酶释放水平从而增加了细胞的活力，稳定心肌细胞线粒体膜电位。