[发明专利]一种Sanfilippo A综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种Sanfilippo A综合症的慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，其中，所述慢病毒载体还包括SGSH基因。本申请改造后的慢病毒载体的基础上特异地连入SGSH基因，能够在保障安全性的同时实现更高效的基因传递，使得SGSH基因在转基因的大脑相关细胞中的表达量明显增加，能够更高效的完成Sanfilippo A综合症基因治疗过程中正常基因的传递。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种Sanfilippo A综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，尤其涉及一种应用改良后的慢病毒载体优化表达SGSH基因用于制备治疗戈谢病的药物。

背景技术

Sanfilippo综合症，属于三型黏多糖积贮症(Mucopolysaccharidosis(MPS)typeIII)，是五种MPSⅢ型综合症中的一种，其属于常染色体隐性遗传疾病，属于神经退行性溶酶体堆积紊乱疾病。MPSⅢA涉及到了硫酸胺酶的缺失从而导致了硫酸乙酰肝素(heparansulfate，HS)在脑部的堆积，主要堆积在网状内皮组织和单核巨噬细胞系统，最严重的是堆积在神经元中，这些堆积导致了器官的功能性紊乱。病人会有严重的行为上的改变，包括多动症和睡眠失调，晚期会有意识和运动功能的下降，寿命会显著缩短。病人多发于儿童或青少年时期，发病起始年龄大多在2-6岁之间，10岁之后病情开始恶化，15岁左右死亡，无性别、种族和地域特异性。

Sanfilippo A是单基因突变造成的溶酶体堆积紊乱疾病(lysosomal storagedisorders，LSDs)，涉及到的基因是SGSH，因此基因治疗方法理论上可以实现对该病的彻底治疗。在脑部直接注射携带正常SGSH基因的毒载体可以直接对基因缺陷细胞进行脑内转染，进而修复各种脑部细胞，分泌出所需要的硫酸胺酶，减少硫酸乙酰肝素的堆积，从而进行下一步的降解，并可以进过交叉校正(cross correction)方式修复周围细胞乃至整个脑部的细胞。体外对病毒载体进行修饰，直接注射入脑，此方法方便快捷，成本低廉，适用性很高。

目前国内外应用病毒载体进行基因传递的基因治疗方法虽然有许多，但是不同病毒载体，甚至相同载体的不同制备方法引起的基因传递效率差异明显，而基因传递效率将直接影响疾病的治疗效果。现在大多应用细胞治疗对遗传病进行治疗的方法均存在效率过低以及仅针对血液干细胞进行修饰，使得疾病治疗的临床效果始终达不到预期，因此急需能够最大程度上提高病毒基因传递效率以及方法来提高遗传疾病的疗效。

Abeona Therapeutics Inc.(Nasdaq：ABEO)是一家临床阶段生物制药公司，致力于开发危及生命的罕见遗传性疾病的治疗，正在进行基因治疗的临床1/2期试验。正在进行的1/2期临床试验已获得FDA的快速审查资(FastTrack designation)，该临床试验旨在评估基因治疗对MPS IIIA患者的安全性和疗效的初步效果。按照试验的设计，在低剂量和高剂量组的受试者接受单次注射向全身特别是中枢神经系统输送病毒载体，以引入构成MPSIIIA的疾病病因的基因矫正拷贝，受试者在注射后最初6个月的多个时间点接受安全评估和生物效价的初始信号评估。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种Sanfilippo A综合症慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用，所述Sanfilippo A综合症慢病毒载体转染效率更高，稳定性更强，安全性更好。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种慢病毒载体，所述慢病毒载体为在pTYF慢病毒载体的5’端的剪接供体位点进行改造，具体改造方式如下：

(a)其5’端的剪接供体位点被删除或改造，改造后的慢病毒载体剪接供体位点不是所述包装载体和所述参照慢病毒之间的同源重组的潜在位点；

(b)其仍具有病毒包装信号功能；