[发明专利]一种矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法及其应用

权利要求书

1.一种矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，包括：

(1)粗提：以桑椹为原料，经醇提浓缩、有机溶剂萃取后得到花色苷萃取液；

(2)大孔树脂吸附：将所述花色苷萃取液注入大孔树脂，经洗脱及后处理得到花色苷提取物冻干粉；

(3)高速逆流色谱分离：以正丁醇-甲基叔丁基醚-甲醇-水-三氟乙酸为两相溶剂体系，经分离后得到花色苷浓缩液；

所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2：2：1：5：0.01～0.1；

(4)固相萃取纯化：将所述花色苷浓缩液注入固相萃取柱，经流动相进行梯度洗脱，再经后处理得到矢车菊素-3-O-芸香糖苷；

所述梯度洗脱的步骤为：先用甲酸的体积百分浓度为0.1～1.5％的甲酸-水体系洗脱，再分别用体积百分浓度为2.5～20％的酸性甲醇溶液进行梯度洗脱，收集体积百分浓度为10～20％的酸性甲醇洗脱液。

2.根据权利要求1所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醇提浓缩，具体为：

将洗净的桑椹与酸性乙醇溶液混合，超声提取完全后过滤并收集滤液，滤液在40～50℃下真空旋转蒸发除去乙醇，得到花色苷粗提液；

所述酸性乙醇溶液为酸的体积百分浓度为0.1～1.0％的乙醇溶液；

所述酸选自盐酸、甲酸、乙酸、柠檬酸中的至少一种；

所述乙醇溶液的体积百分浓度为50～80％；

所述桑椹与酸性乙醇溶液的质量体积比为1：5～12g/mL。

3.根据权利要求1所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述有机溶剂萃取，以乙酸乙酯作为萃取剂，萃取若干次，收集水相，在40～50℃下真空旋转蒸发，除去残留的乙酸乙酯，得到花色苷萃取液。

4.根据权利要求1所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述大孔树脂吸附，具体为：

将所述花色苷萃取液注入大孔树脂中，先用去离子水冲洗大孔树脂，再用酸性醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，然后在40～50℃下真空旋转蒸发除醇后，真空冷冻干燥得到花色苷提取物冻干粉；

所述大孔树脂的比表面积为480～520m²/g，平均孔径为13～14nm，粒径范围为0.3～1.25mm；

所述酸性醇溶液选自酸的体积百分浓度为0.01～1.5％的醇溶液，醇溶液的体积百分浓度为20～70％；

所述醇溶液选自甲醇溶液或乙醇溶液，酸选自盐酸、甲酸、乙酸中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述高速逆流色谱分离，具体为：

配制所述两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，以20～30mL/min的流速将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，在25～35℃、主机转速为700～1000r/min的条件下，以1～8mL/min的流速泵入所述流动相，待两相达到平衡后，将所述花色苷提取物冻干粉用流动相溶解后进样，经液相检测后，收集包含目标产物的流出液，再经减压浓缩得到花色苷浓缩液。

6.根据权利要求5所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，所述两相溶剂系统中，正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2：2：1：5：0.01；

以20～30mL/min的流速将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，在25～35℃、主机转速为850～950r/min的条件下，以3～4mL/min的流速泵入所述流动相；

所述花色苷提取物冻干粉用流动相溶解后的浓度为10～30mg/mL，进样体积为1～15mL。

7.根据权利要求1所述的矢车菊素-3-O-芸香糖苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中，所述固相萃取柱选自C₁₈Sep-Pak cartridge固相萃取柱。