[发明专利]一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的雌二醇衍生物，生物素标记的雌二醇抗体，测试稀释液，雌二醇校准品，雌二醇质控品。本发明的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测血清中雌二醇 E2 含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

技术背景

雌二醇（E2）是育龄妇女体内卵巢或者黄体分泌的雌激素，由卵巢或前列腺分泌后，经血流和组织液转运到靶组织（子宫、输卵管、阴道、垂体等），能与血浆蛋白高度结合，在雌激素反应组织内能与特异性受体蛋白结合形成有活性的复合物，维持第二性征和调控副性器官的功能。

雌二醇（E2）在血液中的浓度主要受下丘脑-垂体-性腺轴调节控制，呈周期性波动规律。雌二醇浓度过高或过低都会导致生殖及内分泌系统紊乱，从而引发多种疾病，例如幼女性早熟、月经紊乱、不孕不育、异位妊娠等，因此准确地测定血液中雌二醇浓度对于疾病的诊断和治疗具有十分重要的临床意义。

用于体内雌二醇测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记雌二醇半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。

目前已有多件磁微粒化学发光方法检测雌二醇的专利申请，如申请号（200910200391）的专利申请是化学发光板的方法，板间差异较大；申请号（201110227587和201110257932）的专利申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记雌二醇抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。

发明内容

本发明要解决的问题是提供雌二醇的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本发明公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的雌二醇的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。

本发明采用的技术方案为：

一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的雌二醇衍生物，生物素标记的雌二醇抗体，测试稀释液，雌二醇校准品，雌二醇质控品。

本发明涉及的链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁，粒径为1um～1.5um，悬浮于磁微粒包被物缓冲液中，浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的浓度为0.5mg/mL；磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为100mM，优选的PH为7.0。

本发明涉及的碱性磷酸酶标记的雌二醇衍生物为碱性磷酸酶和雌二醇衍生物的偶联物，其中雌二醇衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和雌二醇的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和雌二醇的化学合成物质。稀释于酶标记物缓冲液中，稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:1000；酶标记物缓冲液为20mM～200mM Tris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。

本发明涉及的雌二醇衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和雌二醇的化学合成物质，其化学结构式为：