[发明专利]一种复杂糖蛋白二硫键定位的方法

权利要求书

1.一种复杂糖蛋白二硫键定位的方法，该方法包括以下步骤：

（1）α与β亚基的制备：通过反相色谱法对α与β亚基进行分收，分收后的α和β亚基经冷冻浓缩离心机干燥，超纯水重悬；

（2）变性处理：将分收后的α和β亚基，分别进行变性处理，然后用超滤管进行脱盐换液；

（3）α与β亚基酶切：采用多种特异性和/或非特异性酶对变性后的α和β亚基进行反复酶切，最后终止酶切；

（4）对终止酶切后的样品进行质量肽谱图分析，定位二硫键；

其中步骤（1）中所述的反相色谱法使用反相色谱柱，反相色谱柱的填料为C4、C8、C18或聚苯乙烯-二乙烯基苯；

步骤（2）中采用盐酸胍对蛋白进行变性处理；

步骤（3）先使用特异性酶对β亚基进行反复酶切，以确认β亚基的4对二硫键；再采用非特异性反复酶切，确认β亚基剩余的2对二硫键和α亚基的1对二硫键；

特异性酶为胰蛋白酶、蛋白内切酶或内切糖苷酶F；非特异性酶为枯草杆菌蛋白酶；

特异性酶和/或非特异性酶与糖蛋白用量的质量比为1:25~1:100；

步骤（4）中对酶切后的样品使用超高效液相色谱串联电喷雾-四极杆-飞行时间质谱法进行数据采集，并结合质谱软件进行数据分析；

其中所述的复杂糖蛋白为重组促卵泡激素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于对α与β亚基酶切时，加入缓冲溶液，缓冲液的pH为7 .5-8 .0。