[发明专利]一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，三碘甲状腺原氨酸校准品，三碘甲状腺原氨酸质控品。本发明的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，涉及检测血清中总三碘甲状腺原氨酸 TT3含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。

背景技术

3，5，3′三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）是一种对各种靶器官起作用的重要甲状腺激素，分子量为651，血浆中半衰期为1.5天。大约80%的T3形成于外周组织，由T4在脱碘酶的作用下脱碘转化而来，其余的T3是由于甲状腺球蛋白的水解而被释放进入血液循环。T3的分泌受促甲状腺激素（TSH）和促甲状腺激素释放激素（TRH）的调节，而T3的水平对TSH也存在负反馈调节。

T3是通过与血清中的运载蛋白结合而被转运的，主要有甲状腺素结合球蛋白（TBG），前白蛋白和白蛋白，只有约0.4%的T3是游离的，但游离T3（FT3）才真正具备激素的生物活性。体内TT3的浓度受甲状腺激素结合蛋白的浓度的影响，而FT3不受影响，TT3和FT3保持动态平衡，维持正常的甲状腺功能，所以TT3的定量检测对早期的甲状腺疾病诊断非常有价值。

用于体内总三碘甲状腺原氨酸测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记三碘甲状腺原氨酸半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。

发明内容

本发明要解决的问题是提供总三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本发明公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的总三碘甲状腺原氨酸的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。

本发明采用的技术方案为：

一种总三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物，生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，测试稀释液，总三碘甲状腺原氨酸校准品，总三碘甲状腺原氨酸质控品。

进一步的，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mM Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，PH范围为6.5～8.0。

所述碱性磷酸酶标记的三碘甲状腺原氨酸衍生物为碱性磷酸酶和三碘甲状腺原氨酸衍生物的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，或N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和三碘甲状腺原氨酸的化学合成物质。

所述生物素标记的三碘甲状腺原氨酸抗体为生物素和三碘甲状腺原氨酸抗体的偶联物，其中三碘甲状腺原氨酸抗体为小鼠单克隆抗体。