[发明专利]一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品A、校准品B，所述试剂R2包括乳胶‑多克隆抗体交联物和试剂R2缓冲液，所述乳胶‑多克隆抗体交联物占所述试剂R2的质量百分比为0.05～1.0％，所述试剂R2缓冲液组分为：50～120mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5。本发明所述试剂盒具有血尿同测、操作简单、灵敏度高、线性范围宽、成本低(不仅体现在仅适用一种粒径和多克隆抗体就能满足检测要求，还体现在制备乳胶‑多克隆抗体时仅离心一次就能满足标记需求)且利于市场推广的优点。同时该检测试剂盒兼容市场上大多数生化检测设备，可直接进入市场。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒。

背景技术

视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protcin,RBP)为血液中视黄醇(维生素A)的转运蛋白。RBP主要由肝细胞合成，广泛分布于人体血清、脑脊液、尿液及其他体液中。在血液中，RBP与视黄醇、前白蛋白以1:1:1(mol)的复合物形式存在，转运体内90％的视黄醇至机体组织，当RBP与细胞表面的RBP受体结合时，视黄醇进入细胞内，复合物解体，游离的RBP从肾小球滤出，其中绝大部分被近端肾小管上皮细胞重吸收，并被分解。

研究表明，视黄醇结合蛋白在高血压及糖尿病早期肾病的诊断中具有重要意义，可作为临床诊断高血压及糖尿病早期肾病的参考指标进行临床检测：

(1)与肝病的关系：肝病患者血清中RBP显著低于正常人，且急性病毒性肝炎病程早期血清RBP含量降低较晚期更明显。血清RBP水平能准确、灵敏地反映肝功能变化；

(2)与肾脏病的关系：RBP稳定性好，是一个比β2-MG更实用、可靠的肾功能指标，当肾小管功能受损时，尿中RBP可明显增高，较肌酐、尿素更准确灵敏；

(3)与其它疾病关系：RBP水平是反映营养性疾病疗效的灵敏、特异性指标，甲亢患者RBP水平较正常人低，甲减患者RBP水平高于正常人。此外，当血清RBP低于正常一半时，患者才出现暗适应能力降低，提示血清RBP含量能更灵敏地反映维生素A缺乏症。

临床上广泛使用的RBP检测方法有酶联免疫吸附EIA、单向免疫扩散RID、免疫比浊等。酶联免疫吸附法的检测限较差，并且费时。单向免疫扩散主要是手工操作，试验重复性较差，检测的准确度不高，临床已经不再采用其为定量检测方法。目前临床进行大量样本检测常采用的方法是免疫比浊法，但由于信号低，即灵敏度低无法达到目前市场上要求的血尿同检。

目前市场上有采用胶乳增强免疫比浊法测定RBP，基于双粒径的胶乳增强免疫比浊法、基于双单克隆抗体抗体胶乳增强免疫比浊法、基于一种单克隆抗体和一种多克隆抗体的胶乳增强免疫比浊法，虽然灵敏度足够高可以做到血尿同检，但由于试剂生产成本高，不利于市场推广。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是解决目前市场上检测灵敏度低(只能检测血清中RBP)或生产成本高(能同时检测血清和尿液中的RBP，但是基于双粒径的技术方案生产成本较高)的技术缺陷，提供一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒。本发明所述试剂盒不仅提高了试剂灵敏度，还大大提高了测量范围，可以同时检测血液与尿液样本中的视黄醇结合蛋白含量，同时兼容市场上大多数生化检测设备，可直接进入市场。

本发明解决上述技术问题所采用的技术手段为：

一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品A、校准品B，其中：