[发明专利]一种孕酮酶结合物的制备方法

说明书

本发明涉及一种孕酮酶结合物的制备方法。该方法采用孕酮衍生物（P‑NHS）直接与酶进行交联结合而成，不需要额外添加活化剂和偶联剂。本发明涉及的孕酮衍生物为N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)和孕酮的化学合成物质，或N‑磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo‑NHS)和孕酮的化学合成物质。该方法操作简单，成本低廉，稳定性好。

技术领域

本发明涉及一种应用于化学发光免疫分析技术中的孕酮酶结合物的制备方法。

背景技术

孕酮（英语：Progesterone；化学式：C21H30O2；分子量：314.46），亦称为黄体酮、孕甾酮、黄体甾酮、黄体激素、助孕激素、助孕素或助孕酮。是一种涉及女性月经周期、妊娠和对人类还又其他动物的胚胎有影响的类固醇，是类固醇生物合成过程中生成的第一个具有生物活性的化合物，它由肾上腺皮质、男性睾丸，女性卵巢和胎盘生成，主要代谢产物为孕二醇-3-葡糖苷酸。孕酮是属于一类称为孕激素（progestogen）的荷尔蒙，也是人类最重要的孕激素。

孕酮是一种女性荷尔蒙，参与人类与其他动物的雌性月经周期，支援怀孕与胚胎形成。未怀孕的女性，其孕酮只在每次月经周期的后半段才由卵巢黄体大量分泌。脑，肝与肾上腺也会分泌。怀孕时(第三个月开始)，胎盘也可大量分泌。

促黄体生成素（LH）作用于黄体调节孕酮的合成和分泌。随着LH在月经周期中期达到高峰，黄体开始发育，孕酮的水平也随之增长。在排卵后的5-8天达到最高水平。如果没有受孕，则在下一次行经前4天左右降低至卵泡期水平。如果怀孕，孕酮水平则随着其主要来源胎盘的发育而持续增长，并贯穿整个妊娠期。

血液循环中的孕酮结合蛋白主要有类固醇结合蛋白、白蛋白、性激素结合蛋白，其中主要与白蛋白和类固醇结合蛋白结合，具有生物活性的游离型孕酮仅占总孕酮的2.5～3%。

临床上检测孕酮主要用于确认排卵、评价黄体功能缺失，检验诱导排卵过程的有效性等。目前认为，结合孕酮的检测是除了子宫内膜活检以外可以正确评价黄体功能的一种方法，甚至可以替代子宫内膜活检。正常妊娠和异位妊娠时孕酮水平都会升高。血清孕酮的测定也可用于替代疗法的疗效监测和妊娠早期自发性流产危险性的评估。

用于体内孕酮测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵标记孕酮半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。

目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵，试剂盒中酶标记物合成工艺是国外厂家高度保密的专利技术。

国内厂家酶联免疫吸附分析法（ELISA）试剂盒以及化学发光免疫分析法（CLIA）试剂盒主要采用的孕酮半抗原酶结合物作为标记物，其中孕酮半抗原为孕酮衍生物（P-3-CMO）与牛血清白蛋白（BSA）的结合物（P-3-CMO-BSA）或鸡卵清白蛋白（OVA）的结合物（P-3-CMO-OVA），此种酶结合物生产工艺复杂，成本较高，容易产生空间位阻影响孕酮特异性抗体的结合。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明公开了一种操作简单、成本低廉、稳定性好的孕酮酶结合物，该酶结合物是化学发光免疫分析法检测孕酮试剂盒的关键组分。

本发明涉及的孕酮酶结合物是由孕酮衍生物（P-NHS）与酶发生偶联反应生成，该反应不需要额外添加活化剂和偶联剂。

进一步地，所述孕酮衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 和孕酮的化学合成物质，其化学结构式如下：