[发明专利]一种斑马鱼NK/TCL肿瘤模型的构建方法及其应用

说明书

本发明属于医学生物技术领域，具体涉及一种斑马鱼NK/TCL肿瘤模型的构建方法及其应用。本发明经过研究首次以斑马鱼作为模式生物成功构建了NK/TCL人源肿瘤异种移植模型。实验操作简便可行，实验周期短，消耗肿瘤细胞极少，可重复性高，可广泛应用于分子生物学研究及靶向药物筛选等多种领域。

技术领域

本发明属于医学生物技术领域，具体涉及一种斑马鱼NK/TCL肿瘤模型的构建方法及其应用。

背景技术

NK/T细胞淋巴瘤(natural killer/T-cell lymphoma，NK/TCL)是一类CD56阳性/胞浆CD3阳性的淋巴细胞恶性增殖性疾病，好发于亚洲地区，与Epstein-Barr病毒(EB病毒)感染密切相关。在过去二十年间，一系列分子生物学研究报道了与NK/TCL疾病发生进展相关的多种遗传学及分子生物学异常。比较基因组研究(Comparative genomichybridization，CGH)报道了一系列疾病相关DNA基因拷贝数变化(copy numberalterations)，包括2q5，13q4，10q3，21q2，3q2，5q2和17q2等染色体区段的扩增，以及1p4，17p4，12q3，13q2和6q1等染色体区段的缺失；全外显子测序研究(whole exomesequencing,WES)报道了以DDX3X，TP53，MGA，JAK-STAT信号分子(STAT3和STAT5B)，表观遗传学调控分子(MLL2，EP300，ARID1A和ASXL3)等为代表的一系列肿瘤相关的重现性突变。全基因组表达谱(comprehensive genome-wide gene expression profiling，GEP)研究发现，细胞周期相关信号通路及信号分子，如PLK1，CDK1，Aurora-A等，抗凋亡信号通路及信号分子，如MYC，TP53，NF-kB p50等，均存在显著异常调控。启动子及位点特异性甲基化研究发现，NK/TCL中存在显著的高甲基化，表现为以抑癌基因及BCL2L11(BIM)，DAPK1，PTPN6(SHP1)，TET2，SOCS6和ASNS等基因的转录抑制。microRNA芯片检测，发现miR-101，miR-26a，miR26b，miR-28-5和miR-363存在显著异常表达，通过调控靶基因MUM1，BLIMP1和STMN1等，引起细胞周期、TP53和MAPK等信号通路异常。全基因组关联研究(genome-wideassociation study，GWAS)发现HLA-DPB1的基因组多态性与疾病发生密切相关。然而，上述研究均为基于患者临床标本的组学研究结果，NK/TCL致病分子机制尚待阐明。由于致病机制不明确，缺乏特异性的治疗靶点和标准化治疗策略，NK/TCL患者的疗效预后极差。即使应用当前最优的治疗策略——基于门冬酰胺酶的抗代谢治疗联合放疗，早期患者的5年生存率仅为72％(155例患者统计数据)，晚期患者的5年生存率仅为50％(87例患者统计数据)。NK/TCL呈高度恶性，侵袭性强，常规化疗耐药，预后极差，进展期患者五年生存率仅为20％，已成为严重危害人民健康的疾病。制约NK/TCL发病机制和靶向治疗研究的最主要因素是缺乏可供开展分子生物学研究的NK/TCL动物肿瘤模型。

动物肿瘤模型主要用于分子生物学(包括致病机制研究、治疗靶点新药筛选)研究。人类疾病十分复杂，临床积累的经验在时间和空间上都存在局限性，以人作为实验对象来研究疾病发生机制存在许多伦理和方法上的限制。动物肿瘤模型极大地促进了肿瘤分子生物学研究的进展：1.动物模型与人类具有较高的同源性，且繁殖速度快、样本数目多，可复制性高，实验结果可与人类疾病进行比较研究，快捷有效地认识人类疾病的发生发展规律；2.动物模型可以特异性的进行遗传学修饰，严格控制实验条件，增强实验结果的科学性和可比较性，有助于全面认识疾病的本质；3.动物模型可改变自然条件下不可能或不易改变的因素，尤其在潜伏期长、病程长和发病率低的疾病研究中具有极大的应用价值。