[发明专利]羊α干扰素突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示羊α干扰素突变体的第54位氨基酸由赖氨酸K突变成谷氨酰胺Q得到的突变体；

所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示，其编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.6所示。

2.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求1所述的羊α干扰素突变体进行S30H、P32L、R57K、Q60A、R63Q、F71L、T76A、V77I、L91F、A94E、N101D、H109R、G118D、T121A、M142A、K158G、T178S、A179T或S184R中的任何一种氨基酸单位点突变获得的突变体。

3.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求1所述的羊α干扰素突变体进行P32L-H109R、P32L-F71L、P32L-V77I、P32L-M142A、P32L-K158G、F71L-V77I、F71L-H109R、F71L-M142A、F71L-K158G、V77I-H109R、V77I-M142A、V77I-K158G、H109R-M142A、H109R-K158G或M142A-K158G中的任何一种氨基酸双位点突变获得的突变体。

4.一种羊α干扰素突变体，其特征在于：将权利要求1所述的羊α干扰素突变体进行P32L-F71L-K158G、P32L-V77I-K158G、P32L-H109R-K158G、P32L-F71L-V77I、 F71L-V77I-K158G、F71L-V77I-H109R、F71L-H109R-K158G或V77I-H109R-K158G任何一种氨基酸多位点突变获得的突变体。

5.含有权利要求1至4任何一项所述羊α干扰素突变体的编码基因的重组载体或重组宿主细胞。

6.权利要求1至4任何一项所述的羊α干扰素突变体在制备治疗水疱性口炎病毒感染所致疾病的药物中的用途。

7.一种制备权利要求1至4任何一项所述羊α干扰素突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）分别将权利要求1至4任何一项所述羊α干扰素突变体的编码基因克隆到杆状病毒转移载体中，构建得到重组转移载体；

（2）将重组转移载体与杆状病毒共转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；

（3）将重组杆状病毒感染昆虫细胞或昆虫宿主，培养被感染的昆虫细胞或昆虫宿主表达相应的蛋白，纯化，即得；

其中，所述杆状病毒转移载体选自AcRP23-lacZ、AcRP6-SC、AcUWl-lacZ、BacPAK6、Bacto Pac、Bacmid、p2Bac、p2Blue、p89B310、pAc360、pAc373、pAcAB3、pAcAB 4、PAcAS3、pAcC129、pAcC4、DZI、pAcGP67、pAcIEl、pAcJPl、pAcMLF2、pAcMLF 7、pAcMLF 8、pAcMPl、pAcMP2、pAcRP23、pAcRP 25、pAcRW4、pAcsMAG、pAcUWl、pAcUW21、pAcUW2A、pAcUW2B、pAcUW3、pAcUW31、pAcUW41、pAcUW42、pAcUW43、pAcUW51、pAcVC2、pAcVC 3、pAcYMl、pAcJcC5、pBacl、pBac2、pBlueBacIII、pBlueBacHis、pEV55、mXIV、pIEINeo、pJVETL、pJVNhel、pJVP10、pJVrsMAG、pMBac、pP10、pPAKl、pPBac、pSHONEX 1.1、pSYN XIV VI+、pSYNVI+wp、pSYNXIVVI-、pVL1391、pVL 1392、pVL 1393、pVL941、pVL 945、pVL 985、pVTBac、pBM030或pUAC-5；

所述杆状病毒选自家蚕杆状病毒亲本株BmBacmid、BmNPV、AcMNPV、ApNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或SpltNPV；

所述昆虫宿主选自家蚕(Bombyx mori)、野蚕(Bombyx mandarina)、蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricim)、樟蚕(Dictyoplocajapanica)、樗蚕(Philosamia cynthiapryeri)、柞蚕(Antheraeapernyi)、日本柞蚕(Antheraeayamamai)、野天蚕(Antheraea polyphymus)、苜蓿尺蠖(Atogra pha califorica)、茶尺蠖(Ectropis obliqua)、甘兰夜蛾(Mamestra brassicae)、斜纹夜蛾(Spodoptera littoralis)、秋粘虫(Spodopterafrugiperda)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、行军虫(Thaumetopoea wilkinsoni)、棉铃虫(Heliothis armigera)、美国棉铃虫(Heliothiszea)、烟青虫(Heliothis assulta)、烟草夜蛾(Heliothis virescens)、东方粘虫(Pseudaletia separata)或舞毒蛾(Lymantria dispar)；

所述感染是指重组杆状病毒通过吞食或透过表皮来感染1-5龄的昆虫幼虫或蛹体。