[发明专利]一种检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白cagA的LAMP引物组及其应用

说明书

本发明公开了一种检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白cagA的LAMP引物组及其应用，所述LAMP引物组包括内引物FIP/BIP、外引物F3/B3和环引物LF/LB。本发明的技术效果和优点：操作简单：完成反应只需要一台水浴锅，不需要复杂的仪器和专业的操作人员；快速高效：反应仅需30 min；特异性强：针对cagA基因设置3对引物，充分囊括了整个基因序列，三重保障使得针对性极强，通过其他11种常见肠道菌株DNA验证，发现均无假阳问题；灵敏度高：最低检测限为100 fg DNA。

技术领域

本发明属于生物学技术领域，更具体地说，尤其涉及一种检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白cagA的LAMP引物组及其应用。

背景技术

长期感染HP会提高胃部疾病的发生率，尤其是慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃部恶性肿瘤等，1994年,世界卫生组织/国际癌症研究机构（WHO/IARC）将其列为Ⅰ类致癌因子。但并非所有携带HP的患者都会发病。研究显示，含有细胞毒素相关蛋白A基因（cagA）的HP菌株具有更强的致病性。细胞毒素相关蛋白A（CagA）由cagA基因编码，是HP主要毒力因子。CagA进入胃上皮细胞后，可以与细胞内多种蛋白反应，使胃内细胞功能紊乱，甚至使胃上皮细胞发生病变，从而致病。各项研究指出CagA与十二指肠溃疡、验证和胃癌等肠道疾病关系密切。

此外HP分型检测很困难，因为它可能在宿主体内潜伏很长时间，且不表现出任何症状。目前采用最多的检测方法有：组织病理检查、C13/C14半衰期检查、血清学检测以及PCR反应等，这些方法对仪器要求较高、检测时间长、灵敏度不够且很难做到毒株分型。

针对于此，我们建立了一种灵敏度高、特异性强、操作简单、用时短、成本低，且能准确对HP毒株进行毒性分型的检测方法。该方法基于环介导等温扩增技术（Loop-MediatedIsothermal Amplification，LAMP），在60℃左右水浴10-30 min就可以进行核酸扩增，获得准确的HP分型结果。LAMP整个反应在水浴锅中就可进行，不需要复杂的仪器，且反应中利用多对引物同时进行扩增，特异性强。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白cagA的LAMP引物组及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白cagA的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括内引物FIP/BIP、外引物F3/B3和环引物LF/LB。

一种幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白（cagA）的恒温扩增检测方法，具体包括以下步骤：

S1、所述LAMP引物组包括一对内引物FIP/BIP、一对外引物F3/B3和一对环引物LF/LB组成，引物序列如下：

FIP：TGCAATTTTGTTAATCCGGTCAATTTGAGTGYAAAAATTGACCAAC

BIP：GTTTCAGTGGAGYRGGGCRATGCTTGATTKGYMTCATCA

F3：GCTCAARTTGCYAAAAAGG

B3：CRCTTCTYCTMARAGGGAAG

LF：ATTGCTGATGTAGCTTCGTTGA

LB：KCAGCTAGCCCTGAACCC

三对引物最优比例为8:8:1:1:4:4；