[发明专利]用于动物胚胎解离的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于解离动物离体胚胎的试剂盒，包括名称分别为酶解溶液C、酶解溶液D和酶解溶液E的试剂；

所述酶解溶液C由细胞松弛素储存液和TrypLE消化液组成，所述酶解溶液C中所述细胞松弛素储存液与所述TrypLE消化液的体积比为3:47-3:97；所述细胞松弛素储存液为由细胞松弛素和水组成的溶液；

所述酶解溶液D为由胎牛血清、链霉蛋白酶溶液和TCM-HEPES缓冲溶液组成的液体，所述酶解溶液D中胎牛血清、所述链霉蛋白酶溶液和所述TCM-HEPES缓冲溶液的体积比为1:1:1-1:2:1；所述链霉蛋白酶溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质为链霉蛋白酶；所述TCM-HEPES缓冲溶液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质分别为NaHCO₃、丙酮酸钠、Na-HEPES、HEPES、10x Medium 199和L-谷氨酰胺；

所述酶解溶液E由所述细胞松弛素储存液和Accutase细胞分离液组成，所述酶解溶液E中所述细胞松弛素储存液和Accutase细胞分离液的体积比为3:47-3:97；所述Accutase细胞分离液含有ACCUTASE酶。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由所述酶解溶液C、所述酶解溶液D、所述酶解溶液E和M组成；所述M为清洗试剂A和/或预处理试剂B；

所述清洗试剂A为由溶剂和溶质组成的溶液，所述溶剂为水，所述溶质分别为白蛋白、磷酸二氢钾和氢氧化钠；

所述预处理试剂B为由溶剂和溶质组成的溶液，所述溶剂为水，所述溶质为离子螯合剂以及用于调节pH的氢氧化钠。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞松弛素储存液中所述细胞松弛素的浓度为0.25mg/ml；

和/或，所述链霉蛋白酶溶液中所述链霉蛋白酶的浓度为70U/ml；

和/或，所述TCM-HEPES缓冲溶液中所述溶质的浓度分别为NaHCO₃

0.0336g/200mL、丙酮酸钠0.044g/200mL、Na-HEPES 0.723g/200mL、HEPES 0.526g/200mL、10x Medium 199 20mL/200mL和L-谷氨酰胺0.02922g/200mL；

所述清洗试剂A中所述溶质的浓度分别为白蛋白(3-10)g/100mL、磷酸二氢钾0.68g/100mL、氢氧化钠0.1164g/100mL；

和/或，所述预处理试剂B中所述离子螯合剂的浓度为(0.037-0.111)g/100mL，所述预处理试剂B的pH为6.8-7.2。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞松弛素为细胞松弛素B、细胞松弛素A、细胞松弛素C或细胞松弛素D；

和/或，所述离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠、氮川三乙酸、二乙撑三胺五乙酸、N-羟乙基乙胺三乙酸或乙二醇-双-(B-氨基乙醚)-N，N-四乙酸。

5.动物胚胎解离方法，包括：利用权利要求1-3中任一所述酶解溶液C处理待解离动物胚胎，得到初步解离的胚胎；利用权利要求1-3中任一所述酶解溶液D处理所述初步解离的胚胎，去除所述待解离动物胚胎的透明带，得到去除透明带的胚胎细胞团；利用权利要求1-3中任一所述酶解溶液E处理所述去除透明带的胚胎细胞团，实现所述待解离动物胚胎的解离。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述酶解溶液C处理待解离动物胚胎在离心条件下进行。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述离心的离心力为9700g-11400g；

和/或，所述离心的时间为20-30min。

8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括在利用所述酶解溶液C进行初步解离前利用权利要求2或3中所述预处理试剂B对所述待解离动物胚胎进行预处理。