[发明专利]一种用于靶向肺癌治疗的基因纳米探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于靶向肺癌治疗的基因纳米探针，其特征在于，所述基因纳米探针包括RNA纳米水凝胶和负载在所述RNA纳米水凝胶上的DOX和/或TMPyP4；

所述RNA纳米水凝胶包括DNA自组装单链、成环DNA模板和靶向适配体；

所述DNA自组装单链包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的ASM-DNA-1、核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示的ASM-DNA-2和核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示的ASM-DNA-3，三条DNA单链分别以序列中间为节点，两端两两互补配对，构成三叉型自组装结构；

所述成环DNA模板包括5′端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID N0.4所示的Threelet7a、5′端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID N0.5所示的Three-miR34a和5′端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID N0.6所示的Three-miR145中的一种或多种，所述成环DNA模板通过序列两端的T7启动子互补序列，与所述三叉型自组装结构的分支末端的T7启动子序列互补结合；

所述靶向适配体为SEQ ID N0.7所述序列的5′端修饰有荧光基团、3′端修饰胆固醇的物质；所述靶向适配体通过T7启动子互补序列与成环DNA模板结合。

2.根据权利要求1所述基因纳米探针，其特征在于，所述RNA纳米水凝胶的粒径为80～200nm。

3.根据权利要求1所述的基因纳米探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、FITC或Cy3。

4.根据权利要求1所述的基因纳米探针，其特征在于，所述基因纳米探针中RNA纳米水凝胶与DOX的承载体积比为(5～100)∶100；所述RNA纳米水凝胶与TMPyP4的承载体积比为(1～25)∶5。

5.权利要求1～4任意一项所述基因纳米探针的制备方法，包括以下步骤：

1)将DNA自组装单链与成环DNA模板于Tris-HCl缓冲液中混合进行退火处理，所述退火处理的条件为：95℃，5min，再以0.5℃/min的速度降至16～28℃，得到三叉型自组装结构载体；

2)将步骤1)得到的三叉型自组装结构载体与T4连接酶及T4连接酶缓冲液混合，16℃进行成环反应，得到含有环状模板的三叉型自组装结构载体；

3)将步骤2)得到的含有环状模板的三叉型自组装结构载体与核苷酸三磷酸混合液、RNA酶抑制剂和T7聚合酶及T7聚合酶缓冲液混合，37℃进行滚环转录反应0.5～3h，得到结合环状DNA的载体；

4)将步骤3)得到的结合环状DNA的载体与靶向适配体混合，进行退火处理，所述退火处理的条件为：65℃，5min，再以0.5℃/min的速度降至16～28℃，得到RNA纳米水凝胶。